Stężenie białka i wymiana buforu
Stężenie białek i wymiana buforów są powszechnie stosowane w procesach oczyszczania białek i przeciwciał, bioprzetwarzania i analizy proteomicznej. Preparaty próbek roztworów wielkocząsteczkowych, takich jak białka, enzymy, przeciwciała i wirusy, często dają duże objętości rozcieńczonych białek i innych biomolekuł w buforach, które są niekompatybilne z dalszymi procesami lub wykrywaniem. Po ekstrakcji próbki, rozcieńczone białka często wymagają zatężenia i oczyszczenia przed analizą lub użyciem.
Stężenie białek
Istnieje kilka metod zatężania białek, w tym filtracja za pomocą porowatych filtrów membranowych, dializa w roztworach hiperosmotycznych oraz wytrącanie/solenie. Ultrafiltracja zapewnia wygodną metodę, która wykorzystuje półprzepuszczalne membrany do koncentracji białek pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową przy minimalnej denaturacji, dezaktywacji i degradacji białek. Stosując tę technikę, nadmiar płynu przechodzi przez filtr, podczas gdy docelowe białko jest zatrzymywane, zwiększając stężenie białka poprzez zmniejszenie objętości próbki.
Wzbogacanie białek
W wzbogacaniu białek, określone grupy lub typy białek w próbce biologicznej są zagęszczane do dalszej analizy. Metody wzbogacania białek są stosowane do izolowania białek o niskiej liczebności i zmniejszania złożoności próbki. Wzbogacanie oddziela i koncentruje białka docelowe w celu poprawy dalszej analizy proteomicznej. Ultrafiltracja jest często stosowana we wzbogacaniu białek w celu oddzielenia klas białek na podstawie masy cząsteczkowej.
Wymiana buforu i odsalanie
Purynowane białka często muszą być przeniesione do odpowiedniego buforu w celu dalszej analizy. Wymianę buforu, odsalanie i usuwanie detergentów można przeprowadzić przy użyciu metod obejmujących:
- Dializa: Małe przepuszczalne cząsteczki, takie jak sole, detergenty, rozpuszczalniki i inne zanieczyszczenia są usuwane w oparciu o ich zdolność do przechodzenia przez membranę.
- Chromatografia kolumnowa: Sole są usuwane za pomocą kolumn do filtracji żelowej, które opierają się na wykluczeniu wielkości do separacji.
- Diafiltracja: Sole, detergenty i inne zanieczyszczenia są usuwane na podstawie ich wielkości molekularnej przy użyciu porowatych membran ultrafiltracyjnych pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową.
Powiązane artykuły techniczne
- Odsalanie w skali laboratoryjnej jest sprawdzoną, prostą i szybką metodą, która szybko usuwa zanieczyszczenia o niskiej masie cząsteczkowej, jednocześnie przenosząc próbkę do pożądanego buforu w jednym kroku.
- Amicon Stirred Cells skutecznie koncentrują i buforują makrozole dzięki filtracji ciśnieniowej.
- Poznaj zasady działania membran ultrafiltracyjnych i korzyści związane z przygotowywaniem próbek białek, w tym z wymianą rozpuszczalników i zatężaniem próbek.
- Optymalizacja warunków solnych dla wiązania białek i przechodzenia zanieczyszczeń w chromatografii w celu osiągnięcia wymaganej selektywności.
- Ta strona obejmuje szczegółowe aspekty każdego kroku w separacji IEX w celu poprawy rozdzielczości i ogólnej wydajności.
- Zobacz wszystkie (13)
Powiązane protokoły
- Tabele te pomogą w przygotowaniu wielu popularnych roztworów buforowych według pH i pKa. Wybierz bufor z efektywnym zakresem pH dla konkretnego testu.
- Ta strona pokazuje, jak wykonać odsalanie próbki, wymianę buforu i zatężanie dla chromatografii powinowactwa znakowanych białek.
- Podręcznik użytkownika dla komórek mieszających Amicon®, w tym funkcje, obsługa, specyfikacje i rozwiązywanie problemów.
- Detergents are frequently used to solubilize proteins and nucleic acids during purification, but the presence of detergents may interfere with downstream analyses.
- If an antibody must be purified from a small sample volume (0.5-10 mL), then the Amicon® Pro Purification System is recommended.
- Zobacz wszystkie (23)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?