Instrukcja obsługi: Komory mieszające Amicon^®

Wprowadzenie

Komory mieszadłowe Amicon^® przeznaczone są do szybkiego zatężania i/lub diafiltracji roztworów makromolekularnych. Używane w połączeniu z zewnętrznym źródłem sprężonego gazu i mieszadłem magnetycznym, komory mieszające zapewniają wysokie współczynniki stężenia i wysoki odzysk próbki. Są idealne do odsalania lub wymiany buforu i mogą być używane w trybie diafiltracji ciągłej lub nieciągłej.

Amicon^® Cechy komory mieszanej

• Filtracja ciśnieniowa połączona z mieszaniem magnetycznym zapewnia delikatną metodę zatężania i zmniejsza denaturację próbek biologicznych wywołaną ścinaniem.
• Magnetyczne mieszadło umieszczone na interfejsie filtracji znacznie minimalizuje ryzyko polaryzacji stężenia i późniejszego zanieczyszczenia membrany.
• Trzy rozmiary oferują szeroki zakres objętości procesu (do 400 ml), który można dodatkowo rozszerzyć poprzez dodanie zewnętrznego zbiornika.
• Elastyczna, łatwa w użyciu konstrukcja może pomieścić szeroką gamę membran ultrafiltracyjnych i mikroporowatych przy różnych ciśnieniach i temperaturach.
• Minimalna objętość zatrzymania i łatwe odzyskiwanie próbki.
• Autoklawowalny do sterylnych zastosowań.

Dostępne modele

UWAGA: Minimalna objętość koncentratu musi być określona empirycznie przez użytkownika, ponieważ zależy ona od składu próbki i prędkości mieszania.

Tryby pracy

Komory mieszające mogą pracować w trybie zatężania lub diafiltracji. W trybie zatężania ciśnienie gazu jest przykładane bezpośrednio do komory mieszającej. Substancje rozpuszczone o masie większej niż masa cząsteczkowa membrany (MWCO)/rozmiar porów są zatrzymywane w komorze, podczas gdy woda i substancje rozpuszczone o masie mniejszej niż MWCO/rozmiar porów przechodzą przez membranę do filtratu.

Diafiltracja jest szybką i wydajną techniką odsalania, a także wymiany buforowej roztworów. Może być wykonywana w trybie wsadowym (nieciągłym) lub o stałej objętości (ciągłym).

Diafiltracja nieciągła: Próbka jest najpierw zatężana do stałej objętości, a następnie rozcieńczana z powrotem do pierwotnej objętości początkowej za pomocą wody lub buforu. I odwrotnie, próbkę można rozcieńczyć do stałej objętości wodą lub buforem, a następnie zatężyć z powrotem do pierwotnej objętości. Oba procesy są powtarzane do momentu usunięcia lub obniżenia stężenia pozostałej soli lub rozpuszczalnika.

Ciągła diafiltracja: Sole buforowe są usuwane, wymieniane lub obniżane poprzez dodawanie wody lub buforu wymiennego w tym samym tempie, w jakim zbierany jest filtrat. Ciągła diafiltracja jest łagodniejsza i bardziej wydajna niż diafiltracja nieciągła, ponieważ utrzymuje stabilność produktu poprzez utrzymywanie stałego stężenia i objętości próbki podczas diafiltracji.

Zbiornik mieszany Amicon^® Stirred Cell Reservoir (6028) lub Zbiornik ciśnieniowy z dozownikiem (XX6700P01) mogą być używane do zastosowań diafiltracji i zwiększenia pojemności komórek mieszających. W trybie ciągłej diafiltracji, zbiornik/zbiornik ciśnieniowy zawierający roztwór do diafiltracji jest podłączony do komory mieszającej i zasilania ciśnieniem gazu poprzez Amicon^® Stirred Cell Selector Valve (6003) lub podobny zawór(y) dostarczony(e) przez użytkownika. Zawór selekcyjny umożliwia natychmiastowe przełączanie między trybami zatężania i diafiltracji bez przerywania pracy systemu. Połączenie zewnętrznego zbiornika i zaworu selekcyjnego Amicon^® tworzy prosty system diafiltracji, który utrzymuje stałą objętość mieszanego płynu komórkowego i stężenie makrocząsteczek, gdy objętość filtratu jest zastępowana roztworem diafiltracyjnym. W obu trybach, Amicon^® Stirred Cell Manifold (6015) może być używany do równoległej pracy wielu mieszadeł.

Komponenty komory mieszającej Amicon^®

Materiały wymagane, ale niedostarczane

• Krążki membranowe do ultrafiltracji lub mikrofiltracji
• Mieszadło magnetyczne
• Źródło czystego, regulowanego, sprężonego powietrza lub azotu z końcówkami/łącznikami rurowymi odpowiednimi do podłączenia do rurki o średnicy zewnętrznej ¼ cala (OD) przy żądanym ciśnieniu roboczym
• Pojemniki zbiorcze

Ograniczenie ciśnienia

Nie używaj urządzenia do pracy pod ciśnieniem. (OD) przy żądanym ciśnieniu roboczym

Pojemniki zbiorcze

Ograniczenie ciśnienia

Nie używaj mieszadła powyżej 5,2 bar (75 psi).2 bar (75 psi).

Montaż i obsługa

Tryb koncentracji

1. Zatrzaśnij uchwyt membrany na podstawie.

2. Umieścić membranę w uchwycie membrany, zgodnie z instrukcją membrany (błyszczącą stroną do góry dla membran ultrafiltracyjnych). Umieść O-ring na górze membrany i delikatnie dociśnij, aby osadzić membranę w uchwycie.

UWAGA: Zapoznaj się z instrukcją membrany dotyczącą płukania i kompatybilności chemicznej. Membranę należy trzymać za krawędź, aby uniknąć zarysowania lub zanieczyszczenia powierzchni.

3. Wyrównaj port filtratu na uchwycie membrany ze szczeliną w dolnej części korpusu komórki. Przykręć podstawę do korpusu komórki.

4. Podłącz zespół rurek filtratu do portu filtratu na uchwycie membrany.

5. Włóż pręt mieszający do korpusu komórki, aż pierścień podtrzymujący zostanie osadzony na grzbiecie wewnątrz górnej części korpusu komórki.

6. Wlać żądaną próbkę do celi.

7. Po ustawieniu nasadki w sposób pokazany na rysunku, umieść dużą średnicę uszczelki w rowku uszczelki. Delikatnie popchnij uszczelkę w dół, aby całkowicie ją osadzić.

WAŻNE!  Aby uniknąć wycieków między nasadką a korpusem ogniwa, upewnij się, że uszczelka jest wolna od brudu / zanieczyszczeń i prawidłowo ułożona w nasadce.

8. Przykręć nasadkę do korpusu ogniwa, aż się zatrzyma.

9. Przesuń niebieski suwak w dół, aby zamknąć zawór nadciśnieniowy i zablokować nasadkę na miejscu.

10. Przymocuj zespół przewodu wlotu ciśnienia, wkładając złącze żeńskie do szybkozłączki na nasadce, aż usłyszysz kliknięcie

11. Umieścić mieszaną celę na mieszadle magnetycznym i włożyć rurkę filtratu do odpowiedniego pojemnika zbiorczego.

12. Aby skoncentrować, podłącz wolny koniec przewodu wlotowego ¼ in. OD do regulowanego źródła ciśnienia. Aby zwiększyć pojemność komory mieszania za pomocą zbiornika komory mieszania Amicon^® i zaworu selekcyjnego komory mieszania Amicon^®, należy zapoznać się z konfiguracją opisaną w części Tryb diafiltracji.

UWAGA: Do zwiększania ciśnienia w kuwecie należy używać czystego sprężonego powietrza lub azotu. W przypadku wrażliwych roztworów sprężone powietrze może powodować duże zmiany pH z powodu rozpuszczania dwutlenku węgla. Może również wystąpić utlenianie.

OSTRZEŻENIE: Nie przekraczać limitu ciśnienia 5,2 bara (75 psi).

13. Rozpocząć mieszanie i zwiększyć ciśnienie w mieszanej komorze do żądanego ciśnienia. Optymalne ciśnienie robocze można znaleźć w instrukcji membrany.

UWAGA: Upewnij się, że mieszadło nie dotyka powierzchni membrany. W przypadku membran bez podparcia, przed mieszaniem należy zwiększyć ciśnienie w komorze mieszania.

14.

Tryb diafiltracji

W przypadku diafiltracji nieciągłej (wsadowej) zagęścić do pożądanego poziomu, a następnie rozcieńczyć z powrotem do objętości początkowej. Powtarzaj ten proces, aż pozostała sól lub rozpuszczalnik zostaną usunięte lub ich stężenie zostanie obniżone.

W przypadku diafiltracji ciągłej (o stałej objętości), podłącz mieszadło do zewnętrznego zbiornika (np, 6028), poprzez zawór selekcyjny komory mieszającej Amicon^® Stirred Cell Selector Valve (6003) lub podobny zawór(y) dostarczony(e) przez użytkownika w celu niezależnego sterowania wyjściem gazu i cieczy. Zawór selektora może być używany do natychmiastowego przełączania między trybami zatężania i diafiltracji bez przerywania pracy systemu. Szczegółowe instrukcje znajdują się w odpowiednich podręcznikach użytkownika.

UWAGA: Podczas ciągłej diafiltracji ciśnienie nie powinno przekraczać 3,8 bara (55 psi), aby utrzymać równowagę między mieszadłem a zbiornikiem. Jeśli poziom cieczy nieznacznie wzrośnie, należy ją krótko zagęścić.

OSTRZEŻENIE: Aby zapobiec przedostawaniu się cieczy do ciśnieniowego zaworu nadmiarowego komory mieszania podczas ciągłej diafiltracji, nie należy przekraczać maksymalnej objętości roboczej (np, 50 ml dla komory mieszającej 50 ml).

Obsługa wielu komór w trybie zatężania lub diafiltracji

W obu trybach, Amicon^® Stirred Cell Manifold (6015) może być używany do równoległej pracy wielu mieszanych komórek. Szczegółowe instrukcje znajdują się w instrukcji obsługi rozdzielacza.

Wyłączanie i demontaż

1. Po zakończeniu filtracji wyłącz ciśnienie u źródła, a następnie wyłącz mieszadło magnetyczne.
   
   OSTRZEŻENIE: Nie odłączaj rurki wlotowej ciśnienia, dopóki mieszana cela nie zostanie pozbawiona ciśnienia.
   
   UWAGA: Aby zmaksymalizować odzysk zatrzymanych substancji, należy kontynuować mieszanie przez kilka minut po obniżeniu ciśnienia w celu ponownego zawieszenia spolaryzowanej warstwy na powierzchni membrany.
   
   
2. Przesuń niebieski suwak w górę, aby odpowietrzyć ciśnienie resztkowe i odłączyć blokadę nasadki.

3. Odłącz szybkozłączkę, naciskając metalową wypustkę i odciągając ją od nasadki.

4. Odkręć nasadkę i wyjmij ją z korpusu komórki.

5. Usunąć mieszadło i odzyskać stężoną próbkę. W razie potrzeby zachowaj próbkę filtratu.

Rozwiązywanie problemów

Czyszczenie, konserwacja i przechowywanie

• Po każdym użyciu mieszadło i wszystkie przewody doprowadzające ciecz należy wyczyścić łagodnym detergentem laboratoryjnym i przepłukać dejonizowaną wodą.
• Wymień O-ring i uszczelkę przy pierwszych oznakach uszkodzenia lub zużycia.
• Okresowo sprawdzaj korpus komory pod kątem pęknięć i sprawdzaj pręt mieszający pod kątem zużycia podkładki lub szorstkich krawędzi, które mogłyby uszkodzić membranę.
  OSTRZEŻENIE: Nie używaj mieszadła, jeśli jego obudowa jest pęknięta lub spękana.
• Zdemontuj mieszadło, gdy jest mało prawdopodobne, że będzie używane przez kilka tygodni.
• Przechowuj wszystkie komponenty w temperaturze pokojowej.

Sterylizacja/sanityzacja

Komórki mieszające Amicon^® Stirred Cells są kompatybilne ze standardowymi mieszaninami gazów sterylizujących. Można je również sterylizować w autoklawie przez co najmniej 10 cykli w temperaturze 121°C, pod ciśnieniem 1 bara (250°F, 15 psi) przez 30 minut, z powolnym cyklem wydechu. Jednakże, ze względu na zmienne pozostające poza naszą kontrolą, nie udzielamy ani nie sugerujemy gwarancji na więcej niż 10 cykli autoklawowania. Zespół rurki wlotu ciśnieniowego NIE jest autoklawowalny.

OSTRZEŻENIE: Aby uniknąć uszkodzenia korpusu komórki, podstawa i nasadka powinny być tylko częściowo dokręcone przed autoklawowaniem.

Do dezynfekcji użyj 70% etanolu lub izopropanolu. Do dezynfekcji należy użyć 5% formaliny.

Kompatybilność chemiczna

Nie używaj mieszadła z silnymi kwasami lub zasadami (pH < 2 lub > 10), ketonami (w tym acetonem), węglowodorami aromatycznymi (w tym toluenem), rozpuszczalnikiem Cellosolve^® halogenowanymi węglowodorami, dimetyloformamidem, estrami alifatycznymi, dimetylosulfotlenkiem i polarnymi związkami aromatycznymi.

W przypadku innych kompatybilności rozpuszczalników należy zapoznać się ze standardowym tekstem lub skontaktować się z działem technicznym. Informacje na temat odporności chemicznej membran dyskowych można znaleźć w instrukcji produktu.

Specyfikacje