Znakowanie i modyfikacja białek
Białka składają się z łańcuchów polipeptydowych, a ich funkcje biologiczne są częściowo określane przez prawidłowe składanie, rozmiar i liczbę reaktywnych grup funkcyjnych obecnych w całym łańcuchu polipeptydowym. Zdolność do dostarczania specyficznych dla danego miejsca modyfikacji białek zapewnia naukowcom możliwość badania szerokiego zakresu właściwości i ich ogólnej funkcji biologicznej. Technologie znakowania i modyfikacji białek obejmują dodawanie fluoroforów, biotyny i innych małych cząsteczek w celu badania interakcji białko-białko, fałdowania białek, badania ogólnej struktury białek i ich funkcji biologicznych.
Fluorescencyjne znakowanie białek
Odkrycie i szeroko rozpowszechnione włączenie zielonego białka fluorescencyjnego (GFP) jest potężnym przykładem tej technologii. GFP i jego odpowiedniki miały ogromny wpływ na wiele dziedzin nauki i nasze zrozumienie procesów biologicznych. Na przykład, dołączanie znaczników fluorescencyjnych do przeciwciał pozwala na wykrywanie i kwantyfikację wysoce specyficznych kompleksów białkowych w tkankach lub kierunkowe unieruchamianie kompleksów przeciwciało-białko w zastosowaniach ELISA i western blot. Jednak istotną wadą stosowania GFP jest to, że funkcja białka może zostać zakłócona przez włączenie dodatkowych znaczników białkowych tej wielkości. Aby obejść to wyzwanie, naukowcy mogą użyć mniejszych znaczników fluorescencyjnych w porównaniu do GFP, biotyny lub włączyć nienaturalne aminokwasy, które zawierają funkcjonalność biorthogonal.
Koniugacja enzym-białko
Włączenie unikalnych enzymów lub sond jest kolejną metodą stosowaną przez naukowców do znakowania białek. Powszechnie stosowane koniugacje enzym-białko obejmują fosfatazę alkaliczną (AP) i peroksydazę chrzanową (HRP). Istnieje wiele zalet stosowania technologii znakowania enzymów białkowych, ponieważ pozwalają one na wzmocnienie sygnału, różnorodne sygnały wyjściowe i istnieje wiele substratów dostępnych dla każdego enzymu. Typowe sygnały wyjściowe obejmują wykrywanie fluorescencyjne, chemiluminescencyjne lub kolorymetryczne. Różnorodność tych sygnałów wyjściowych sprawia, że nadają się one do zastosowań opartych na immunohistochemii (IHC) lub immunofluorescencji (IF) w komórkach i tkankach.
Następujące technologie znakowania białek
W dziedzinie badań nad chorobami i odkrywania leków, technologia ukierunkowanej degradacji białek jest intensywnie badana przez naukowców w celu identyfikacji nowych celów leków i potencjalnych środków terapeutycznych. Technologia chimer ukierunkowanych na proteolizę wykorzystuje dwufunkcyjne cząsteczki, które są zaprojektowane na jednym końcu tak, aby wiązać się z docelowym białkiem chorobowym, podczas gdy drugi koniec wiąże się z ligazą E3 w celu wyeliminowania białka z komórki. Połączona specyficzność tych cząsteczek do szerokiego zakresu celów chorobowych i ich zdolność do kierowania ich do degradacji białek przy użyciu wewnętrznych komórkowych systemów degradacji białek sprawiają, że są one potężną technologią znakowania białek do badań nad chorobami.
Powiązane artykuły techniczne
- Poznaj różne rodzaje fosforylacji, istotnego procesu komórkowego, który umożliwia magazynowanie energii poprzez przekształcanie ADP w ATP. Porównaj fosforylację oksydacyjną i fosforylację na poziomie substratów za pomocą pomocnych diagramów.
- The basic structure of peptidoglycan (PGN) contains a carbohydrate backbone of alternating units of N-acetylglucosamine (GlcNAc) and Nacetylmuramic acid, with the N-acetylmuramic acid residues cross-linked to peptides.
- Modyfikacje peptydów: N-końcowe, wewnętrzne i C-końcowe
- Pochodne chromogeniczne i fluorogeniczne są nieocenionymi narzędziami w biochemii, mającymi liczne zastosowania w enzymologii, chemii białek, immunologii i histochemii.
- Dowiedz się więcej o spektrometrii mas lub MS, w tym o tym, czym jest, do czego służy i jak działa.
- Zobacz wszystkie (84)
Powiązane protokoły
- Ta strona przedstawia sposób usuwania znaczników GST poprzez enzymatyczne rozszczepienie przy użyciu produktów Cytiva.
- Na tej stronie przedstawiono sprzęganie przez pierwszorzędową aminę ligandu z aktywowaną NHS sefarozą High Performance, aktywowaną NHS sefarozą 4 Fast Flow i aktywowaną CNBr sefarozą firmy Cytiva.
- Ten protokół pokazuje, jak usunąć znaczniki histydynowe poprzez enzymatyczne rozszczepienie przy użyciu produktów Cytiva.
- This page shows how to purify or remove biotin and biotinylated substances with Streptavidin Sepharose High Performance from Cytiva.
- Wprowadzenie do PAGE. Zapoznaj się z podstawami SDS-PAGE i protokołem separacji białek na podstawie wielkości w żelu poliakrylamidowym.
- Zobacz wszystkie (22)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?