Cytometria przepływowa
Cytometria przepływowa to technologia wykorzystująca pojedynczy lub wiele laserów w celu zapewnienia wieloparametrycznej analizy pojedynczych komórek. Każda komórka lub cząsteczka jest analizowana przez rozproszenie światła widzialnego lub przez fluorescencję, gdy komórki szybko przepływają obok każdego lasera. Niezależnie od analizy rozproszenia światła, pomiary fluorescencji uzyskuje się poprzez transfekcję i ekspresję popularnych białek fluorescencyjnych (np. zielonego białka fluorescencyjnego, GFP) oraz barwienie fluorescencyjnie sprzężonymi przeciwciałami lub barwnikami fluorescencyjnymi. Cytometria przepływowa to potężna technologia, która jest powszechnie stosowana w badaniach z zakresu biologii molekularnej i komórkowej, w tym immunologii, biologii nowotworów i badań nad chorobami.
Powiązane artykuły techniczne
- Odkryj wskazówki dotyczące eksperymentów wielokolorowej cytometrii przepływowej, w tym wyzwania związane z wielokolorową cytometrią przepływową, kroki tworzenia wielokolorowego panelu cytometrii przepływowej, barwniki tandemowe i narzędzia do projektowania testów wielokolorowych.
- Końcówki do wyboru barwników do cytometrii przepływowej dopasowują fluorofory do konfiguracji cytometru przepływowego, zwiększając wydajność panelu.
- Need tips on how to improve your flow cytometry analysis? Check out this flow cytometry troubleshooting guide with possible causes and solutions for most common problems encountered during flow cytometry experiments, including a loss or lack of signal, high background, decreasing acquisition rates, and more.
- Dostępne procedury, odczynniki i sprzęt do fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH).
- Pomiar czasu życia fluorescencji ma przewagę nad pomiarami opartymi na intensywności. Zastosowania obejmują testy czasu życia fluorescencji, wykrywanie i FLI.
- Zobacz wszystkie (18)
Powiązane protokoły
- Zapoznaj się z naszym przewodnikiem po cytometrii przepływowej, aby poznać podstawy cytometrii przepływowej, tradycyjne komponenty cytometru przepływowego, kluczowe etapy protokołu cytometrii przepływowej i właściwe kontrole".
- Learn key steps in flow cytometry protocols to make your next flow cytometry experiment run with ease.
- We presents a protocol for Immunofluorescence Procedure. A large number of the Prestige Antibodies have been used in subcellular localization studies by immunofluorescence (IF) staining of three cell lines: A-431, U-2 OS, and U-251MG.
- Obejrzyj filmy instruktażowe i pobierz instrukcje obsługi laboratoryjnych systemów wodnych Milli-Q® SQ 2Series. Będziesz gotowy do pracy w mgnieniu oka. Kupuj online systemy, akcesoria, wkłady i usługi.
- Jak wybarwiać organoidy? Kompletny protokół krok po kroku do barwienia immunofluorescencyjnego (IF) i immunocytochemicznego (ICC) hodowli organoidów przy użyciu przeciwciał
- Zobacz wszystkie (11)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Przeciwciała i etykiety do cytometrii przepływowej
Przeprowadzenie analizy cytometrii przepływowej wymaga użycia różnych przeciwciał i etykiet do cytometrii przepływowej. Przeciwciała cytometrii przepływowej są używane do specyficznego wiązania się z różnymi markerami komórkowymi, pomagając scharakteryzować typ komórki i ocenić wszelkie zmiany w ekspresji białek w ramach eksperymentu. Do wizualizacji przeciwciał w celu ich wykrycia w cytometrze przepływowym można użyć wielu rodzajów etykiet, w zależności od projektu eksperymentu, w tym barwników kwasów nukleinowych, barwników żywotności komórek, barwników polimerowych, kropek kwantowych, małych cząsteczek organicznych i białek fluorescencyjnych. Przeciwciała są zwykle znakowane poprzez bezpośrednie sprzężenie (jako produkty dostępne w handlu lub zestawy sprzęgające umożliwiające użytkownikowi końcowemu przeprowadzenie reakcji) lub poprzez zastosowanie przeciwciał drugorzędowych.
Zastosowania cytometrii przepływowej
Liczne dziedziny badań wykorzystują cytometrię przepływową i często analizują wiele parametrów w różnych populacjach komórek. Typowe zastosowania w biologii molekularnej obejmują analizę rekombinacyjnie wyrażonych białek fluorescencyjnych, które indukowały ekspresję w różnych typach komórek w celu wyjaśnienia funkcji genów lub śledzenia komórek w in vivo . Podczas gdy barwienie DNA pozwala na analizę cyklu komórkowego, zastosowanie przeciwciał pozwala na szeroki zakres analiz, w tym transdukcję sygnału, RNA i ekspresję białek. Jednak immunofenotypowanie jest jednym z najczęściej używanych zastosowań cytometrii przepływowej. W przypadku immunofenotypowania przeciwciała sprzężone z fluorochromami celują w wiele antygenów powierzchniowych komórek, aby zidentyfikować określone komórki odpornościowe w populacji komórek.
Analiza danych cytometrii przepływowej
Analiza danych cytometrii przepływowej często obejmuje identyfikację określonego regionu komórek lub klastra i zastosowanie dodatkowych parametrów w ramach eksperymentu, w tym zbadanie, czy obecne są dodatkowe czynniki identyfikujące komórki w celu uzyskania dalszego wglądu w tożsamość komórkową. Liczne programy komputerowe są dostępne i powszechnie stosowane w celu ułatwienia tego rodzaju analizy danych i innych analiz cyklu komórkowego.
Oprzyrządowanie do cytometrii przepływowej
Podsumowanie podstawowych komponentów stosowanych w cytometrach przepływowych obejmuje elektronikę, optykę i układy hydrauliczne. Układ hydrauliczny służy jako system dostarczania cieczy w celu skierowania próbki do elementów optycznych, składających się z optyki wzbudzającej (laser) i optyki zbierającej, która składa się z fotodiod i lamp fotopowielaczowych (PMT). Co ważne, komponenty elektroniczne konwertują informacje z detektorów na sygnały cyfrowe, które są interpretowane przez komputery. Kombinacje dodatkowych systemów ułatwiają bardziej zaawansowane analizy próbek, w tym wykorzystanie sorterów komórkowych do oczyszczania i zbierania próbek oraz cytometrów obrazujących, które łączą zarówno cytometrię przepływową, jak i mikroskopię fluorescencyjną.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?