Ekspresja białek
Postępy w genomice, klonowaniu i licznych technikach biologii molekularnej pozwalają naukowcom na ekspresję heterologicznych białek w wielu systemach biologicznych. Zdolność do ekspresji rekombinowanych białek zapewnia badaczom szeroki zakres potężnych aplikacji do dalszych badań. Nadekspresja białek na małą skalę może ułatwić badania mające na celu zrozumienie funkcji białek; podczas gdy produkcja białek na dużą skalę jest niezbędna do produkcji enzymów, przeciwciał i szczepionek. Określenie optymalnych warunków wzrostu komórkowego i ekspresji białek ma kluczowe znaczenie zarówno dla systemów ekspresji białek na małą, jak i na dużą skalę. Niezależnie od tego, czy jest to prokariotyczny, czy eukariotyczny system ekspresji, który jest potrzebny do modyfikacji potranslacyjnych, typ komórki w dużej mierze określi, jakie narzędzia i odczynniki są wymagane do optymalnej ekspresji białka.
Powiązane artykuły techniczne
- Review the 10 steps of glycolysis in the Embden-Meyerhof-Parnas glycolytic pathway. Easily compare reaction stages and buy the enzymes for your life science research.
- Inżynieria genetyczna umożliwia ekspresję na dużą skalę i izolację rekombinowanych białek do celów badawczych.
- Protein synthesis is a complex, multi-step process involving many enzymes as well as conformational alignment. However, the majority of antibiotics that block bacterial protein synthesis interfere with the processes at the 30S subunit or 50S subunit of the 70S bacterial ribosome.
- Wektory ekspresyjne FLAG® i 3xFLAG® oraz produkty do bakteryjnych i ssaczych wektorów ekspresyjnych, wykrywania i oczyszczania białek.
- Wykres szlaków metabolicznych IUBMB-Sigma-Nicholson przedstawia szlaki metabolizmu ATP w mitochondriach i chloroplastach, kierując syntezą ATP przez syntazę ATP.
- Zobacz wszystkie (143)
Powiązane protokoły
- Yeasts are considered model systems for eukaryotic studies as they exhibit fast growth and have dispersed cells.
- Achieve high protein yields with the ALiCE® Cell-Free Protein Synthesis System that allows you to obtain “difficult to produce” proteins in a matter of hours instead of weeks.
- This page details the Duolink® In Situ Short Protocol for fluorescence detection
- Next Generation Cell Free Protein Expression Kit (Wheat Germ) (CFPS700) PROTOCOL
- It is possible dissolve 1 tablet in as little as 2 ml double distilled Water, results in a 25x stock solution, without difficulty.
- Zobacz wszystkie (25)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Wektory ekspresji białek
Wektory ekspresji lub plazmidy to koliste sekwencje DNA, które są powszechnie używane przez naukowców jako narzędzie do hostowania genu kodującego interesujące ich białko. Plazmidy zawierające interesujący gen są następnie transformowane lub transfekowane do komórek w celu nadekspresji białka. Plazmidy zawierają różne przydatne elementy, które ułatwiają klonowanie, selekcję klonów, ekspresję i oczyszczanie białek, w tym między innymi wielokrotne miejsce klonowania (MCS), geny oporności na antybiotyki używane do selekcji klonów, unikalne znaczniki do identyfikacji i oczyszczania białek oraz silne regiony promotorowe do napędzania ekspresji białek. Istnieje szeroka gama wektorów do ekspresji białek, ponieważ wiele z tych elementów jest wymiennych w zależności od konkretnych potrzeb aplikacji i typu komórek używanych do ekspresji białek.
Bakteryjne, ssaków i dodatkowe systemy ekspresji białek
Dzięki szybkiej kinetyce wzrostu i transformacji plazmidów w E. coli w ciągu zaledwie kilku minut, bakterie są organizmem roboczym do produkcji białek rekombinowanych. Ekspresja białek bakteryjnych opiera się na podjednostkach rybosomalnych 30S i 50S rybosomu bakteryjnego 70S. Aby zapobiec wzrostowi komórek wolnych od plazmidów, plazmidy zawierające geny odporne na antybiotyki są stosowane jako metoda selekcji w celu identyfikacji i izolacji bakterii, które włączyły plazmidy zawierające sekwencję kodującą białko będące przedmiotem zainteresowania. Podczas gdy dodatkowe sekwencjonowanie genetyczne jest często konieczne do potwierdzenia obecności sekwencji genu, liczne antybiotyki blokujące syntezę białek bakteryjnych są powszechnie stosowane do usuwania bakterii wolnych od plazmidów. Oprócz bakterii, linie komórkowe owadów, drożdży i ssaków są również powszechnie wykorzystywane do ekspresji białek. Jednakże, w przeciwieństwie do bakterii, eukariotyczne linie komórkowe zawierają dodatkową maszynerię molekularną do generowania modyfikacji potranslacyjnych (np. glikozylacji) i są często niezbędne dla funkcjonalności białka i znaczących dalszych analiz.
Zastosowania do ekspresji białek rekombinowanych
Białka rekombinowane to białka, które są kodowane w plazmidzie wyrażającym białko i zostały zmodyfikowane w celu maksymalnej ekspresji/oczyszczania białka lub zmutowane w celu oceny funkcji białka. Zdolność do dodawania, usuwania lub zmiany sekwencji kodującej białko, nawet o jeden nukleotyd, zapewnia naukowcom niezwykle potężne narzędzie do badania wielu różnych podstawowych pytań badawczych i wyjaśnienia funkcji białka zarówno w zdrowych, jak i chorych tkankach. Implikacje technologii ekspresji białek rekombinowanych wykraczają daleko poza podstawowe zastosowania badawcze i są niezbędne do opracowania ratujących życie terapii i szczepionek.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?