Wektory ekspresyjne FLAG® dla bakterii i ssaków
- FLAG® Mapy wektorów ekspresji tagów i 3xFLAG® Peptydy
- FLAG® i 3xFLAG® Sekwencja DNA znacznika epitopowego i sekwencja aminokwasowa peptydu
- FLAG® i 3x FLAG® Produkty wektorów ekspresyjnych dla bakterii i ssaków
- FLAG® i 3xFLAG®: Sprawdzony system wykrywania i oczyszczania białek
- Wysoko specyficzne przeciwciała do FLAG® i 3xFLAG®. epitopów
- SnapFast™ FLAG® i 3xFLAG® Wykres porównawczy produktów Vector Legacy
FLAG® Tag Expression Vector Maps and 3xFLAG®&Peptydy
Bakteryjne i ssacze wektory ekspresyjne lub konstrukty ekspresyjne są kolistymi plazmidami transfekcyjnymi DNA, które są powszechnie stosowane do nadekspresji rekombinowanych białek będących przedmiotem zainteresowania. Unikalne sekwencje zakodowane w konstrukcie wektora zawierają elementy promotorowe, które są rozpoznawane przez własną maszynerię syntezy białek transfekowanych komórek w celu napędzania ekspresji włączonej sekwencji białka.
System ekspresji FLAG® jest uznanym sposobem ekspresji, oczyszczania i wykrywania rekombinowanych białek fuzyjnych. Odczynniki FLAG® i 3xFLAG® okazały się przydatne w wielu zastosowaniach, takich jak Western blotting, immunocytochemia, immunoprecypitacja, cytometria przepływowa, oczyszczanie białek, badanie interakcji białko-białko, ultrastruktura komórek i lokalizacja białek. Te małe hydrofilowe znaczniki ułatwiają wykrywanie i oczyszczanie rekombinowanych białek fuzyjnych przy użyciu naszych wysoce specyficznych i czułych przeciwciał ANTI-FLAG® .
FLAG® i 3xFLAG® Sekwencja DNA znacznika epitopowego i sekwencja aminokwasowa peptydu
System ekspresji FLAG® wykorzystuje krótki, hydrofilowy 8-aminokwasowy peptyd, który jest połączony z rekombinowanym białkiem będącym przedmiotem zainteresowania. Ze względu na swój hydrofilowy charakter, peptyd FLAG® prawdopodobnie znajduje się na powierzchni białka fuzyjnego. W rezultacie peptyd FLAG® jest łatwo dostępny do rozszczepienia przez enterokinazę (Ek) i do wykrywania za pomocą przeciwciał. Ponadto, ze względu na niewielki rozmiar znacznika peptydowego FLAG® nie jest prawdopodobne, aby przesłaniał on inne epitopy, domeny lub zmieniał funkcję, wydzielanie lub transport białka fuzyjnego.
System 3xFLAG® jest ulepszeniem oryginalnego systemu poprzez połączenie 3 tandemowych epitopów FLAG® (22 aminokwasy). Wykrywanie białek fuzyjnych zawierających 3xFLAG® jest wzmocnione do 200 razy bardziej niż jakikolwiek inny system. Podobnie jak oryginalny znacznik FLAG® 3xFLAG® jest hydrofilowy, zawiera miejsce rozszczepienia Ek i jest stosunkowo mały. Dlatego ryzyko zmiany funkcji białka, blokowania innych epitopów lub zmniejszenia rozpuszczalności jest zminimalizowane.
Sekwencje aminokwasowe FLAG® i 3xFLAG®
Usuwanie N-końcowych znaczników FLAG®(8 aminokwasów) i 3xFLAG® (22 aminokwasy) jest możliwe przy użyciu enterokinazy, która rozszczepia sekwencję aminokwasową Asp-Asp-Asp-Asp-Lys na c-końcowym końcu znaczników.
FLAG®i 3x FLAG® Produkty wektorów ekspresyjnych dla bakterii i ssaków
Klasyczne wektory ekspresyjne FLAG® i 3xFLAG® zostały przekształcone w wektory ekspresyjne SnapFast™ - łącząc dwa wysoce funkcjonalne systemy w jednym produkcie. Dodatkowe informacje na temat systemu SnapFast™ obejmują Tło & Popularne wektory, Wykresy wyboru i SnapFast™ FAQ.
Wektory FLAG® i 3xFLAG® są dostępne do ekspresji bakteryjnej i u ssaków, przy użyciu promotorów T7, Tac lub CMV. Wektory posiadają miejsce rozszczepienia enterokinazy w celu usunięcia znacznika z oczyszczonego białka. Wraz z c-myc, niektóre wektory oferują podwójne znakowanie. Aby uzyskać więcej informacji, w tym mapy wektorów, zapoznaj się z poniższymi wykresami i kliknij łącza do stron produktów.
FLAG® and 3xFLAG®: Sprawdzony system wykrywania i oczyszczania białek
Niski poziom ekspresji rekombinowanych białek w komórkach ssaków jest powszechnym problemem, który często utrudnia lub uniemożliwia wykrywanie znaczników epitopowych. Wykrywanie 3x FLAG® przy użyciu ANTI-FLAG® M2 Ab i anty-mouse-HRP jest 20-200 razy bardziej czułe niż jakikolwiek powszechnie stosowany znacznik. Szeroki wybór wektorów p3xFLAG® wykorzystuje silny promotor CMV do napędzania ekspresji.
Western blot oczyszczonej 3xFLAG® bakteryjnej fosfatazy alkalicznej i FLAG® bakteryjnej fosfatazy alkalicznej przeniesionej na membranę nitrocelulozową. Detekcję przeprowadzono przy użyciu przeciwciała monoklonalnego ANTI-FLAG® M2 jako przeciwciała pierwszorzędowego, przeciwciała drugorzędowego anty-mysiego-HRP i substratu chemiluminescencyjnego ECL™.
C-końcowe fuzje GST i znaczników wymienionych powyżej zostały przygotowane i przeanalizowane na Western Blots. Wszystkie białka zostały wykryte przy użyciu odpowiednich przeciwciał znakujących, anty-mysich HRP i ECL.
Wysoko specyficzne przeciwciała przeciwko FLAG® i 3xFLAG® epitopów
Przeciwciała FLAG® i 3xFLAG® zawierają miejsca wiązania dla kilku wysoce specyficznych przeciwciał monoklonalnych (M1, M2, M5) i poliklonalnych oraz koniugatów, z których każde ma inną charakterystykę rozpoznawania i wiązania. Przeciwciała ANTI-FLAG® wykazują niewielką lub żadną reaktywność krzyżową w większości lizatów komórek ssaków i bakterii. Formaty jednoetapowego oczyszczania obejmują żele powinowactwa i płytki 96-dołkowe.
SnapFast™ FLAG®< i 3xFLAG® Tabela porównawcza produktów Vector Legacy
Uwaga: Jeśli w przeszłości korzystałeś z wektora FLAG® vector, ta tabela pomoże Ci wybrać najbliższy wektor SnapFast™ FLAG® i 3xFLAG® vector.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?