Wektory ekspresyjne systemu 3xFLAG® do ultraczułego wykrywania rekombinowanych białek
System 3xFLAG® stanowi udoskonalenie oryginalnego systemu poprzez połączenie trzech tandemowych epitopów FLAG® dających łącznie 22 aminokwasy (Rysunek 1). Wykrywanie białek fuzyjnych zawierających 3xFLAG® jest wzmocnione do 200 razy bardziej niż jakikolwiek inny system. Podobnie jak oryginalny znacznik FLAG, 3xFLAG® jest hydrofilowy, zawiera miejsce rozszczepienia Enterokinazy i jest stosunkowo mały. Dlatego ryzyko zmiany funkcji białka, blokowania innych epitopów lub zmniejszenia rozpuszczalności jest zminimalizowane. W przypadku niskiego poziomu ekspresji, 3xFLAG® jest idealnym rozwiązaniem. Nasz wybór wektorów CMV zapewnia opcje dla przejściowej lub stabilnej ekspresji 3xFLAG® białek fuzyjnych.
- Ultrasensitive System - Detect < 10 femtomoli przy użyciu przeciwciał ANTI-FLAG® (Rysunek 2); Idealny w przypadkach niskiego poziomu ekspresji w komórkach ssaków.
- Superior Detection - 20-200x bardziej czuły niż jakikolwiek inny system (Rysunek 3).
- Wszechstronność - Ulepszona detekcja dla immunoprecypitacji, Western blot i immunocytochemii.
- Szeroki wybór produktów do wykrywania i oczyszczania - Przeciwciała ANTI-FLAG, żywice i płytki do wychwytywania powinowactwa.
Rysunek 1.Sekwencja 3xFLAG®. Usunięcie N-końcowych znaczników 3xFLAG® jest możliwe przy użyciu enterokinazy, która rozszczepia sekwencję aminokwasów Asp-Asp-Asp-Asp-Lys na c-końcowym końcu znacznika.
Rysunek 2.Western blot oryginalnego FLAG i 3xFLAG®. Western blot oczyszczonego 3xFLAG®-BAP (bakteryjna fosfataza alkaliczna) i FLAG®-BAP przeniesionego na membranę nitrocelulozową. Detekcję przeprowadzono przy użyciu pierwotnego przeciwciała monoklonalnego ANTI-FLAG® M2, wtórnego przeciwciała anty-mysiego-HRP i substratu chemiluminescencyjnego ECL™.
Rysunek 3.Czułość porównawcza 3xFLAG®. Każdy znacznik fuzyjny białka został sklonowany oddzielnie na C-końcu GST. Oczyszczone białka rozcieńczono od 1 ug do 0,01 ng i poddano analizie. Granicę wykrywalności każdego znacznika określono za pomocą analizy Western blot przy użyciu zalecanych rozcieńczeń każdego odpowiedniego przeciwciała pierwotnego i drugorzędowego koniugatu anty-mysiej IgG-HRP. Blot został opracowany przy użyciu ECL.
Cechy wektorów CMV
Nasze wektory ekspresyjne dla ssaków zawierają silny promotor CMV zapewniający wysoki poziom konstytutywnej ekspresji w komórkach ssaków. Silny region regulatorowy promotora ludzkiego wirusa cytomegalii (CMV) napędza konstytutywne poziomy ekspresji białka tak wysokie, jak 1 mG/L w komórkach COS. W przypadku słabszych linii komórkowych poziom białka wynosi zazwyczaj ~0,1 mG/L. Obecność genu replikacyjnego SV40 skutkuje wysokim poziomem replikacji DNA w komórkach COS dopuszczających replikację SV40. Wektory zawierające sekwencję lidera preprotrypsyny (PPT) kierują wydzielanie białek fuzyjnych FLAG do pożywki hodowlanej w celu oczyszczenia za pomocą przeciwciał ANTI-FLAG, żywic i płytek.
Wektory do ekspresji przejściowej
- Fuzje N-końcowe
- Ekspresja cytoplazmatyczna
- Sekwencja wiodąca PPPT do wydzielania
- Konfiguracje z podwójnym znacznikiem
- Usuwanie przez enterokinazę 3xFLAG® tag
- pochodzenie pMB1 (pochodna pBR322) do replikacji w komórkach bakteryjnych
- gen beta-laktamazy do selekcji oporności na ampicylinę u bakterii
Rysunek 4.Regiony MCS
Wektory stabilnej ekspresji
- Stabilna ekspresja z selekcją neomycyną (siarczan G 418)
- Konfiguracje terminala N lub C
- Ekspresja cytoplazmatyczna lub wydzielanie
- Fuzje N- lub C-końcowe
- Konfiguracje podwójnych znaczników
- Ekspresja cytoplazmatyczna lub wydzielanie
- Usuwanie przez enterokinazę N-końcowych znaczników 3xFLAG®
- pochodzenie pMB1 (pochodna pBR322) do replikacji w komórkach bakteryjnych
- gen beta-laktamazy do selekcji oporności bakterii na ampicylinę
Rysunek 5.Stabilny wektor ekspresji
wektory stabilnej ekspresji BICEP™
- Najwyższa stabilna ekspresja
- Neor gen jest translowany w sposób niezależny od czapeczki pod kontrolą EMCV IRES
- Stabilna produkcja linii komórkowej bez obawy o utratę plazmidu
- Poziom ekspresji przewyższa konkurencję 30-krotnie
- Utrzymuje wysoki poziom ekspresji po wielu pasażach
Rysunek 6.Wektor stabilnej ekspresji Bicep
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?