Immunohistochemia
Metody wykrywania immunohistochemii (IHC) i immunofluorescencji (IF)
Immunohistochemia (IHC) to metoda biochemiczna wykorzystująca przeciwciała, które wiążą się z określonymi antygenami w wycinku tkanki. Podobnie immunocytochemia (ICC) jest odpowiednia do identyfikacji antygenów w poszczególnych warstwach komórek. IHC jest powszechnie stosowana do wizualizacji białek, węglowodanów i lipidów będących przedmiotem zainteresowania zarówno w zdrowych, jak i chorych tkankach, takich jak te występujące w guzach nowotworowych. Specyficzne markery molekularne są charakterystyczne dla zdarzeń komórkowych, takich jak proliferacja lub śmierć komórki (apoptoza). IHC jest również szeroko stosowana w badaniach podstawowych w celu zrozumienia rozmieszczenia i lokalizacji biomarkerów i białek o różnej ekspresji w różnych częściach tkanki biologicznej.
Nagrodzone kategorie
Poznaj rekombinowane przeciwciała ZooMAb®, opracowane z myślą o wyjątkowej spójności i wydajności w różnych zastosowaniach
Systemy Milli-Q® oferują innowacyjne technologie oczyszczania wody opracowane z myślą o potrzebach badawczych laboratoriów, celach zrównoważonego rozwoju i innych ważnych wymaganiach.
Przygotowanie tkanek IHC, odzyskiwanie antygenu i obróbka wstępna
Tkanki są zazwyczaj utrwalane, zatapiane w parafinie i skrawane do analizy IHC przy użyciu mikrotomu. Istotnym krokiem następującym po wstępnym przygotowaniu tkanki jest potrzeba odzyskania antygenu. Jest to konieczne, aby przerwać wiązania krzyżowe białek powstałe podczas utrwalania i odkryć ukryte miejsca antygenowe. Warunki odzyskiwania antygenu i obróbki wstępnej muszą być określone empirycznie, ponieważ dostępność epitopu antygenu może się znacznie różnić w zależności od wielu czynników biologicznych. Na przykład, niektóre antygeny mogą wymagać bardziej agresywnej obróbki wstępnej w celu "zdemaskowania" ich epitopów wiążących przeciwciała, podczas gdy obróbka wstępna może nie być w ogóle wymagana dla niektórych antygenów. Dwie powszechne metody wstępnego odzyskiwania antygenu obejmują odzyskiwanie epitopu indukowane ciepłem (HIER), w którym źródło ciepła jest używane w połączeniu z buforami i enzymami (proteinaza K). Druga metoda, Proteolytic-Induced Epitope Retrieval (PIER) to kolejna metoda odzyskiwania antygenu, w której można stosować różne proteazy, takie jak proteinaza K, trypsyna, chymotrypsyna lub pepsyna.
Barwienie i detekcja IHC
Po przygotowaniu tkanki i wstępnej obróbce antygenu, wizualizację interakcji przeciwciało-antygen można osiągnąć na wiele sposobów. Jedna z powszechnych metod wykorzystuje pierwotne przeciwciało, które jest sprzężone z enzymem, takim jak peroksydaza chrzanowa lub fosfataza alkaliczna, który katalizuje reakcję wytwarzającą kolor. Alternatywnie, metoda immunofluorescencji (IF) wykorzystuje przeciwciało, które jest znakowane fluoroforem, takim jak fluoresceina, rodamina lub Alexa Fluor. Inną opcją jest użycie nieznakowanego przeciwciała pierwotnego, z pośrednim wykrywaniem antygenu przez znakowane przeciwciało wtórne lub bardziej złożone systemy wykrywania. W takim przypadku należy określić optymalne miano zarówno przeciwciała pierwotnego, jak i wtórnego dla każdego testu.
Odwiedź naszą wyszukiwarkę dokumentów, aby znaleźć arkusze danych, certyfikaty i dokumentację techniczną.
Powiązane artykuły
- Nitroblue Tetrazolium (NBT) is used with the alkaline phosphatase substrate 5-Bromo- 4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (BCIP) in western blotting and immunohistological staining procedures. These substrate systems produce an insoluble NBT diformazan end product that is blue to purple in color and can be observed visually.
- Using antibodies in the lab from selection, antibody concentration and antibody storage
- ZooMAb® Antibodies Frequently Asked Questions
- Sigma® Antibody Bioguarantee – Complete peace of mind with your antibody purchase. Exemplary scientific support and a full credit or replacment product if you ar not complete satisfied
- Przeciwciała łączą się z określonymi antygenami w celu wytworzenia ekskluzywnego kompleksu przeciwciało-antygen. Dowiedz się więcej o naturze tego wiązania i jego wykorzystaniu jako znacznika molekularnego w badaniach.
- Zobacz wszystkie (26)
Powiązane protokoły
- Protokół ten służy do przeprowadzenia całej procedury immunohistochemii (IHC) poprzez barwienie i wizualizację określonych antygenów w skrawkach tkanek zatopionych w parafinie.
- In the midst of beeping lab timers, presentations and grant deadlines, it is easy to take for granted the quality of lab reagents.
- One major rationale for investigating the subcellular location of a specific protein is that location is often tightly connected to function. For example, proteins locating to the nucleus are frequently implicated in gene regulation, proteins in mitochondria with energy production and Golgi-related proteins are often associated with protein modification and sorting.
- Prestige Antigens™ and the corresponding Prestige Polyclonals or Monoclonals are recommended to use according to the standard Prestige Antigen-blocking protocol
- We presents a protocol for the Prestige Antibody Immunohistochemistry Procedure. The Prestige Antibodies are subjected to a standardized test procedure using specially designed tissue microarray (TMA) slides.
- Zobacz wszystkie (10)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Jak możemy pomóc
W przypadku jakichkolwiek pytań, prosimy o przesłanie prośby o wsparcie klienta
lub rozmowę z naszym zespołem obsługi klienta:
Email custserv@sial.com
lub zadzwoń +1 (800) 244-1173
Dodatkowe wsparcie
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulatory i aplikacje
Web Toolbox - narzędzia naukowe i zasoby dla chemii analitycznej, nauk przyrodniczych, syntezy chemicznej i materiałoznawstwa.
- Customer Support Request
Obsługa klienta, w tym pomoc przy zamówieniach, produktach, kontach i kwestiach technicznych związanych z witryną.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?