Wzrost i utrzymanie komórek
Hodowla komórkowa jest podstawową techniką wykorzystywaną w badaniach z zakresu nauk przyrodniczych do tworzenia odpowiednich modeli biologicznych lub produkcji rekombinowanych białek, cząsteczek wirusów lub terapii biologicznych. Wzrost i utrzymanie hodowanych komórek, takich jak bakterie, drożdże i komórki ssaków, odbywa się w szafie bezpieczeństwa biologicznego (często nazywanej okapem do hodowli komórek lub tkanek) przy użyciu odpowiedniej sterylnej techniki, aby zapobiec zanieczyszczeniu mikrobiologicznemu i chemicznemu.
Rodzaje hodowli komórkowych
Dwa najbardziej znane podejścia do hodowli komórek ssaków to hodowla pierwotna i hodowla ciągła. Hodowle pierwotne pochodzą bezpośrednio z tkanki ludzkiej lub zwierzęcej i mają żywotność w hodowli ograniczoną przez starzenie się komórek. Hodowle ciągłe są uważane za "nieśmiertelne" w hodowli, ponieważ często pochodzą z tkanki nowotworowej pacjenta.Linie komórkowe mogą być również tworzone poprzez unieśmiertelnianie komórek i mogą być seryjnie rozmnażane lub przechodzone przez wiele cykli podziału komórek lub w nieskończoność.
Powiązane artykuły techniczne
- Wiedzieć, kiedy stosować antybiotyki, aby zapobiec skażeniu bakteryjnemu, grzybiczemu, mykoplazmowemu lub wirusowemu w hodowli komórkowej i znaleźć odpowiednie antybiotyki lub inne czynniki biologiczne.
- Krzywa zabijania antybiotyków to eksperyment dawka-odpowiedź, w którym komórki ssaków są poddawane rosnącej ilości antybiotyku selekcyjnego.
- Poli-lizyna zwiększa wiązanie komórek z dodatnio naładowanymi jonami powierzchniowymi, optymalizując interakcje elektrostatyczne na powierzchniach hodowli w celu zwiększenia przyczepności komórek.
- Cell Culture Freezing Tips - Are you following best practices for cryostorage? We have cool tips for protecting your cells.
- Experimental studies measuring cell proliferation have had implications in cancer biology, immunology, cell biology, and developmental biology.
- Zobacz wszystkie (12)
Powiązane protokoły
- Rozcieńczona fibronektyna do mocowania komórek, w zależności od typu komórek. Protokół powlekania, produkty i często zadawane pytania.
- Odkryj naszą kolekcję pierwotnych ludzkich wątrobowych komórek Kupffera i protokół rozmrażania, umieszczania i hodowli komórek Kupffera. Znajdź skład pożywki do hodowli komórek Kupffera.
- Odkryj naszą kolekcję pierwotnych ludzkich komórek śródbłonka zatok wątrobowych, protokół rozmrażania, umieszczania na płytkach i hodowli HHSEC oraz przepis na naszą formułę pożywki podtrzymującej HHSEC.
- Cryopreservation efficacy which includes post-thaw recovery, viability, and functionality is of importance to both research and clinical applications. The cumulative stresses that result from the cryopreservation process and suboptimal freeze media result in cell death from necrosis and apoptosis.
- Zobacz wszystkie (5)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Komórki mogą być hodowane w zawiesinie lub jako monowarstwa 2D, która przylega do kolby do hodowli tkanek lub płytki wielodołkowej. Metoda hodowli zależy od tkanki pochodzenia komórek; komórki pochodzące z krwi zwykle rosną w zawiesinie, podczas gdy te pochodzące z tkanek stałych zwykle rosną w monowarstwach.
Modele hodowli komórek 3D (organoidy i sferoidy) są ogólnie uważane za bardziej zbliżone do środowiska in vivo komórki niż komórki hodowane na powierzchniach 2D. Sferoidy są często tworzone z linii komórek nowotworowych lub biopsji guza (ksenografty pochodzące od pacjenta lub PDX) jako swobodnie pływające agregaty komórek w płytkach o bardzo niskim poziomie przyczepności, podczas gdy organoidy są zwykle uzyskiwane z tkankowych komórek macierzystych osadzonych, a następnie różnicowanych w matrycy hydrożelowej ECM.
Fazy wzrostu komórek
Zapewnienie odpowiedniego wzrostu komórek ma kluczowe znaczenie dla gromadzenia dokładnych danych z badań hodowli komórkowych. Liczbę komórek można określić za pomocą hemocytometru lub automatycznego licznika komórek, który oferuje bardziej precyzyjne zliczanie komórek.
Wzrost komórek w hodowli odbywa się zazwyczaj w czterech fazach:
- Lag phase - Komórki dostosowują się do warunków hodowli i nie dzielą się.
- Log (logarytmiczna) faza wzrostu - Komórki aktywnie się dzielą, więc jest to najlepszy etap, podczas którego można ocenić wzrost populacji lub zebrać dane. Późna faza logarytmiczna to najlepszy czas na pasażowanie (subkulturę) komórek.
- Faza plateau (stacjonarna) - Wzrost spowalnia, gdy komórki zbliżają się do 100% konfluencji, a komórki są najbardziej podatne na stres lub uszkodzenia, ponieważ gromadzą się odpady komórkowe, a zasoby są wyczerpane.
- Faza schyłkowa - Populacja żywych komórek zmniejsza się, gdy dominuje śmierć komórek.
Podłoża do hodowli komórkowych, suplementy i odczynniki
Hodowane komórki wymagają dostarczania składników odżywczych do wzrostu. Pożywki do hodowli komórek ssaków muszą utrzymywać fizjologiczne pH, a także dostarczać zrównoważonych soli, węglowodanów, aminokwasów, witamin, kwasów tłuszczowych i lipidów, białek i peptydów, pierwiastków śladowych i czynników wzrostu. Płodowa surowica bydlęca (FBS) jest najczęściej stosowanym suplementem wzrostu do hodowli komórek ssaków, ponieważ zawiera wiele z tych niezbędnych komórkowych składników odżywczych i wykazano, że wspiera wzrost komórek i tkanek w hodowli. W przypadku zastosowań wymagających zdefiniowanych pożywek lub zmniejszonej ilości składników zwierzęcych, preparaty pożywek xeno-free zapewniają preparaty wolne od zwierząt o znanym składzie.
Ponieważ pożywki i suplementy często dostarczają bogatych składników odżywczych do wzrostu drobnoustrojów oportunistycznych, udana hodowla komórkowa wymaga aseptycznej techniki i regularnej obserwacji w celu zapewnienia braku zanieczyszczeń, które mogą powodować śmierć komórek lub zakłócać wzrost in vivo. W przypadku powszechnych zanieczyszczeń mikrobiologicznych, których nie można zaobserwować mikroskopowo, rutynowe badania przesiewowe z użyciem odczynników do wykrywania mykoplazmy chronią kultury i środowiska propagacji tkanek. cerevisiae i P. pastoris (Pichia), są powszechnie stosowane w badaniach nad ekspresją białek rekombinowanych i badaniem funkcji genów. Krytyczne składniki odżywcze zwykle zawarte w składzie pożywki do hodowli drożdży to pepton, ekstrakt drożdżowy oraz dekstroza lub glukoza.
Porady i wskazówki dotyczące pasażowania komórek
Pasażowanie komórek jest podstawowym krokiem w ogólnej hodowli komórek w celu utrzymania ich zdrowia i optymalnego wzrostu. Ten samouczek wyjaśnia proces pasażowania komórek, w tym znaczenie konfluencji i gęstości komórek. Protokół pasażowania komórek obejmuje takie procesy, jak monitorowanie i liczenie komórek, trypsynizacja lub dysocjacja komórek oraz ponowne wysiewanie komórek do nowego naczynia hodowlanego.
Środowisko hodowli komórek i sprzęt do hodowli
Hodowane komórki są hodowane i obsługiwane przy użyciu jednorazowych, sterylnych plastikowych naczyń, w tym kolb do hodowli tkanek i płytek wielodołkowych, pipet serologicznych, sterylnych filtrów butelkowych i sterylnych filtrów strzykawkowych. Plastikowe kolby i płytki do hodowli tkankowych są zwykle poddawane obróbce w celu zapewnienia hydrofilowej powierzchni ułatwiającej przyleganie komórek. Jako alternatywa dla powierzchni 2D, płytki oparte na mikroporowatej membranie zapewniają bardziej fizjologiczne środowisko wzrostu dla złożonych testów komórkowych, takich jak migracja komórek, komunikacja komórka-komórka i polaryzacja komórek.
Hodowane komórki muszą być utrzymywane w temperaturze i środowisku gazowym, które odtwarza te parametry w organizmie, z którego pochodzą. Naczynia hodowlane zawierające komórki i pożywki są zwykle utrzymywane w urządzeniach inkubacyjnych, które zapewniają precyzyjną kontrolę temperatury i mieszanin gazów. Jednak małe systemy inkubacji stacjonarnej, które wykorzystują mikroprzepływy i ułatwiają obrazowanie komórek w nieprzerwanej hodowli, mogą zapewnić najbardziej autentyczne środowisko dla predykcyjnych modeli in vitro.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?