Protokół powlekania fibronektyną

Ważne punkty do zapamiętania przed rozpoczęciem

1. Upewnij się, że komórki są zdrowe i w odpowiedniej liczbie.
2. Produkty fibronektyny dostarczane w postaci roztworów mogą być przechowywane przez co najmniej rok w temperaturze 2 - 8 °C, jeśli są przechowywane sterylnie.
3. Zamień produkty fibronektyny dostarczane w postaci liofilizowanych proszków w odpowiednich rozpuszczalnikach. Rozpuszczać przez co najmniej 30 minut w temperaturze 37°C. Może pozostać niewielka ilość nierozpuszczonego materiału. Nie wpłynie to na działanie produktu. Odtworzony roztwór fibronektyny może być przechowywany w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -20 °C lub niższej.
4. Należy unikać worteksowania lub nadmiernego mieszania roztworów fibronektyny.
5. Naczynia hodowlane pokryte fibronektyną mogą być przechowywane przez 2-4 tygodnie w temperaturze 2-8 °C w zamkniętym sterylnym pojemniku lub sterylnych zamykanych torebkach.
6. Stężenie pokrycia powierzchni może się różnić w zależności od hodowanych komórek. Zaleca się optymalizację protokołu w celu określenia rzeczywistego stężenia powłoki dla komórek. Zalecane stężenia są wymienione w Tabeli 1.
7. Nie należy nadmiernie suszyć płytek hodowlanych/pokryw po powlekaniu, ponieważ wpływa to na przyczepianie się komórek.
8. Wszystkie kroki w protokołach muszą być wykonywane w sterylnych warunkach.

Protokół powlekania fibronektyną naczyń hodowlanych

1. Rozcieńczyć fibronektynę do pożądanego stężenia. Optymalne warunki mocowania zależą od typu komórek i zastosowania. Typowe stężenie powłoki wynosi 1 - 5 ug/cm².
2. Pokryć powierzchnię hodowli minimalną objętością.
3. Po pokryciu całego obszaru usunąć nadmiar roztworu. Można go użyć do pokrycia innej studzienki/płytki.
4. Suszyć na powietrzu przez co najmniej 45 minut w temperaturze pokojowej przed wprowadzeniem komórek i pożywki.

Tabela 1. Fibronektyny do mocowania komórek

Nr produktu	Opis	Stężenie powłoki	Rozcieńczyć w
< href=	Opis	Stężenie powłoki	Rozcieńczyć w
10838039001	Fibronektyna z ludzkiego osocza	5 μg/cm2	Jałowa woda
.FIBRP-RO	Fibronektyna (czysta)	5 μg/cm2	Jałowa woda
F0556	Roztwór fibronektyny z ludzkich fibroblastów	1-5 μg/cm2	sterylny HBSS
F0635	Fibronektyna szczurze osocze	1-5 μg/cm2	Sterylna woda
F0895	Fibronektyna ludzkie osocze	1-5 μg/cm2	Sterylny zrównoważony roztwór soli
F1056	Fibronektyna z ludzkiego osocza	1-5 μg/cm2	Jałowa woda
F1141	Fibronektyna z osocza bydlęcego	1-5 μg/cm2	Jałowa woda
F2006	Fibronektyna ludzkie osocze	1-5 μg/cm2	Sterylna woda
F2518.	Fibronektyna z ludzkich fibroblastów napletka	1-5 μg/cm2	Jałowa woda
F4759	Fibronektyna z osocza bydlęcego	1-5 μg/cm2	Jałowa woda
FC010	Human Plasma Fibronectin Purified Protein	2-10 μg/cm2	Sterylny zrównoważony roztwór soli
FC014	Fibronektyna, bydlęca	2-10 μg/cm2	sterylny zbilansowany roztwór soli
S5171	Superfibronektyna z ludzkiego osocza	1 μg/cm2	Jałowy PBS
.ECM001	Fibronektyna ludzka, rekombinowana, wyrażana w HEK	1-5 μg/cm2	Jałowa woda

Fragmenty proteolityczne fibronektyny

Fragmenty fibronektyny są uzyskiwane z fibronektyny osocza za pomocą enzymów proteolitycznych. Fragmenty te są użytecznymi narzędziami do mapowania regionów w cząsteczce fibronektyny, które są odpowiedzialne za specyficzne wiązanie z kolagenem i za inne istotne biologicznie funkcje.

Tabela 2. Fragmenty fibronektyny do badań wiązania

Numer produktu	Opis	Aktywność wiązania
Numer produktu	Opis	Aktywność wiązania
/PL/plF9911	.Fragment proteolityczny fibronektyny z ludzkiego osocza, 30 kDa	Fragment wiążący heparynę
F0162	Fragment proteolityczny fibronektyny z ludzkiego osocza, 45kDa	Fragment wiążący żelatynę
F0287	Fragment proteolityczny fibronektyny z ludzkiego osocza, 70kDa	Fragment wiążący heparynę i żelatynę
F3542	Fibronektyna Fragment III1-C ludzki	Fragment wiążący fibronektynę (samoorganizacja)
F1903	Fibronektyna 40 kDa α Fragment chymotryptowy (region wiążący heparynę), oczyszczony ludzki	Fragment wiążący heparynę
F1904	Fibronektyna 120 kDa α Fragment chymotryptowy (region przyłączania komórek), oczyszczony przez człowieka	region przyłączania komórek fibronektyny

Często zadawane pytania (FAQ)

1. Jaka jest czystość produktów fibronektyny?

Nie określamy czystości roztworów fibronektyny. Przeprowadzany jest żel SDS PAGE, a jedno główne pasmo fibronektyny o masie 120 kDa jest porównywane z poprzednimi partiami, aby zapewnić stałą jakość. Wszystkie nasze proszki fibronektyny mają czystość ≥95%.

2. Jaki jest najlepszy rozpuszczalnik do rozcieńczania fibronektyny?

Rozpuszczalniki, które są kompatybilne z rozcieńczaniem fibronektyny podano w Tabeli 1

3. Jak długo można przechowywać fibronektynę?

Fibronektyny dostarczane w postaci roztworów mogą być przechowywane przez rok w temperaturze 2-8 °C, pod warunkiem, że są sterylne. Rozcieńczona, niewykorzystana fibronektyna może być przechowywana w temperaturze 2 - 8 °C przez okres do 1 tygodnia. Płytki pokryte fibronektyną mogą być przechowywane w temperaturze 2 - 8 °C przez okres do 4 tygodni, pod warunkiem, że są dobrze zamknięte, aby zapobiec zanieczyszczeniu i/lub wyschnięciu fibronektyny. Nie używaj produktu, jeśli na powierzchni powlekanego materiału pojawią się przebarwienia lub pęknięcia

4. Jakie jest optymalne stężenie fibronektyny do powlekania?

Stężenia powlekające naszych fibronektyn są sugerowane w Tabeli 1. Zaleca się jednak optymalizację stężeń, które działają dla komórek.

5. Jakie jest najlepsze białko ECM do badania różnicowania komórek macierzystych?

Podczas gdy laminina i fibronektyna są szeroko stosowanymi białkami ECM, to które z nich jest potrzebne komórce powinno być określone przez eksperymenty testowe. Komórki macierzyste wyrażają różne integryny na powierzchni podczas różnych etapów różnicowania. Wybór białka ECM będzie zależał od etapu różnicowania, który chcesz zbadać.