Rozwiązywanie problemów z kulturami komórkowymi

Hodowla komórek stała się jedną z najbardziej podstawowych technik modelowania systemów biologicznych i ma coraz większe znaczenie w sektorach biotechnologicznym i farmaceutycznym, a także jest niezbędnym procesem w laboratoriach badawczych nauk przyrodniczych. Chociaż technika ta jest wysoce dostępna, udane rozmnażanie komórek w celu powiększenia zasobów lub eksperymentów modelowych może być nękane przez zanieczyszczenia lub inne warunki, które negatywnie wpływają na żywotność komórek. Powszechna praktyka dzielenia się komórkami doprowadziła do dobrze opublikowanych dowodów na zanieczyszczenie krzyżowe zasobów komórek, których tożsamość była wcześniej niekwestionowana. Zidentyfikowanie zarówno powszechnych, jak i rzadkich powodów, dla których komórki mogą się nie rozwijać, może zwiększyć wydajność laboratorium, zwiększyć wydajność produktów komórkowych i zapewnić znaczące, wiarygodne dane z modeli in vitro.

Błędna identyfikacja linii komórkowych

Ostatnie badania szacują, że błędna identyfikacja może dotyczyć nawet jednej trzeciej wszystkich używanych linii komórkowych. Odkrycia te mogą potencjalnie podważyć opublikowane ustalenia dotyczące systemów biologicznych oparte na wynikach modeli linii komórkowych. Czynniki prowadzące do błędnej identyfikacji/zanieczyszczenia krzyżowego linii komórkowych obejmują:

• Zanieczyszczenie agresywnymi liniami komórkowymi: Analiza izoenzymów wykazała, że wiele linii komórkowych dzieli rzadką izoformę enzymu z komórkami HeLa. Od tego czasu wykazano, że HeLa jest najczęstszą inwazyjną linią komórkową w hodowlach.
• Dokumentacja i praktyki etykietowania: Kolby do hodowli komórkowych, płytki, kriofiole i zamrażarki muszą być wyraźnie oznakowane, a mapy przechowywania ciekłego azotu muszą być ściśle przestrzegane, aby odzwierciedlać dodawanie, wycofywanie i przenoszenie zapasów komórek.
• Wypożyczanie linii komórkowych: Dzielenie się komórkami między sąsiednimi laboratoriami jest powszechną praktyką, która prowadzi do błędów w identyfikacji linii komórkowych. Linie komórkowe powinny być pozyskiwane wyłącznie z renomowanych repozytoriów komórkowych, takich jak ECACC, Europejska Kolekcja Uwierzytelnionych Kultur Komórkowych w Public Health England.

Poznaj najczęstsze przyczyny zanieczyszczenia krzyżowego linii komórkowych i dowiedz się, jak chronić swoją pracę przed jego konsekwencjami.

Zanieczyszczenie mikrobiologiczne hodowli komórkowych

Podłoże do hodowli komórkowych i warunki inkubacji stanowią idealne środowisko dla komórek, a także zanieczyszczeń bakteryjnych, grzybiczych i wirusowych. Aby zwiększyć staranne przestrzeganie aseptycznej techniki hodowli, kultury muszą być regularnie badane mikroskopowo pod kątem obecności bakterii i grzybów. Niektóre wszechobecne zanieczyszczenia mikrobiologiczne wymykają się wizualnemu wykryciu, ponieważ szacuje się, że do 30% wszystkich hodowli jest zanieczyszczonych mykoplazmą. Odczynniki i zestawy zaprojektowane do wykrywania niewidocznej mykoplazmy są często oparte na amplifikacji PCR, która może być również stosowana do wykrywania zanieczyszczeń wirusowych.

Dowiedz się, jak utrzymać hodowle wolne od zanieczyszczeń biologicznych i chemicznych.

Słaby wzrost komórek

To frustrujące, gdy komórki w hodowli, które wydają się zdrowe, nie osiągają konfluencji. Po wykluczeniu zanieczyszczeń, niektóre możliwe bariery dla zdrowego podwojenia komórek obejmują:

• Stan i jakość pożywki do hodowli/mrożenia
• Jakość i przydatność suplementów
• Niedokładne zliczanie komórek podczas zamrażania lub pasażowania

Kiedy komórki wydają się żywotne, ale nie rozwijają się, dowiedzieć się, co można zrobić, aby poprawić warunki hodowli dla optymalnego wzrostu przed powrotem do ciekłego azotu.

Odłączanie fenotypów komórek adherentnych

Komórki adherentne mogą spontanicznie odłączać się w hodowli, pojedynczo lub w arkuszach. Gdy hodowle adherentne nie pozostają takie same, dowiedz się, co sprawdzić i jak przywrócić spójność w hodowli.

Skupiska komórek

Komórki w zawiesinie naśladują warunki in vivo jako pojedyncze komórki. Kiedy komórki zaczynają się zbijać, może to być spowodowane lepkimi kwasami nukleinowymi, obecnymi w pożywce, gdy hodowle są zestresowane. Co kryje się w pożywce, co może powodować zlepianie się komórek? Czytaj więcej tutaj o tym, jak wyeliminować zlepianie się komórek z hodowli.

Śmierć komórek w hodowli

Kiedy komórki umierają w hodowli, należy najpierw wykluczyć zanieczyszczenie mikroorganizmami. Inne czynniki, które mogą przyczyniać się do słabej kondycji komórek lub zachowania niezgodnego z fenotypem, obejmują:

• Warunki zamrożonego materiału wyjściowego
• Liczba przejść komórkowych/nadmierna koncentracja
• Stres środowiskowy
• Nadtrawianie enzymami dysocjacyjnymi

.Odpowiedni sprzęt, wykwalifikowane odczynniki i specjalistyczne protokoły są kluczem do rozwiązywanie nieoczekiwanych wyników hodowli komórkowej.

Cząstki stałe w podłożach hodowlanych

Jeśli nie jest to zanieczyszczenie, cząstki stałe w hodowli często mają nieorganiczne wyjaśnienie. Zrozum zrównoważony bufor i składniki pożywki oraz dowiedz się więcej o utrzymywaniu składników pożywki w zawiesinie.