Millicell^® Ultra-Low Attachment Plates Porównanie wydajności formowania sferoidów

• Metody hodowli komórek 3D
• Millicell^® ULA Plate Attributes
• Wyniki formowania sferoid
• Ocena okrągłości sferoid
• Ocena okrągłości sferoidy
• Materiały

Metody hodowli komórek 3D

Powszechna in vitro alternatywa dla bardziej tradycyjnej hodowli komórek 2D lub modeli zwierzęcych, Hodowla komórkowa 3D ma ważne różnorodne zastosowania biologiczne, w tym odkrywanie nowych leków, badania nad rakiem i neuronauki. Modele hodowli komórkowych 3D można ogólnie podzielić na dwie kategorie: metody rusztowaniowe i bez rusztowań. Metoda bez rusztowań pozwala badaczom hodować komórki bez żadnych fizycznych nośników, takich jak hydrożele lub inne fizyczne rusztowania.

Komórki hodowane bez rusztowań tworzą agregaty 3D, znane również jako sferoidy. Sferoidy te są fizjologicznie istotnymi modelami komórkowymi, ponieważ komórki mogą bezpośrednio wchodzić w interakcje z innymi komórkami, macierzą zewnątrzkomórkową (ECM) i ich substratami. Ze względu na ich znaczenie biologiczne, sferoidy są często wykorzystywane przez naukowców w wielu zastosowaniach komórkowych, w tym w wysokowydajnym opracowywaniu leków i badaniach toksykologicznych.

Millicell^® ULA Plate Attributes 

Millicell^® Ultra-low Attachment to 96-dołkowe płytki, które są wstępnie pokryte ultra-hydrofilowym polimerem w celu promowania spontanicznego tworzenia jednolitych sferoidów. Niecytotoksyczna, stabilna i nieprzylegająca powierzchnia dołków w kształcie litery U promuje samoorganizację sferoidów w środowisku o wysokiej przepustowości.

Płytki Millicell^® ULA mają wysoką przejrzystość optyczną, umożliwiając utrwalanie, barwienie oraz obrazowanie zarówno w jasnym polu, jak i mikroskopii konfokalnej. Płytki Millicell^® ULA są zalecane dla powiększeń poniżej 20x, ponieważ studzienka w kształcie litery U negatywnie wpływa na płaskość płaszczyzny ogniskowej przy powiększeniu większym niż 20x. 

Rysunek 1. Płytka Millicell^® Ultra-low attachment plate. Numeracja na górze i na dole płytki ułatwia nawigację po 96 dołkach, a matowa powierzchnia pomaga zwalczać odblaski światła i poprawia odczyt płytki.

 

Poniżej przedstawiamy podobieństwa i różnice między płytkami Millicell^® ULA a płytką konkurencyjną (Konkurent A), aby zademonstrować tworzenie sferoid, okrągłość i kolistość. Konkurent A i płytki Millicell^® ULA to 96-dołkowe płytki z dnem w kształcie litery U:

	Millicell® ULA	Konkurent A
Wnęki przelewowe między studzienkami		✓
Mrożona powierzchnia	✓
Umieszczenie numeru na górze i na dole tabliczki	✓
Płytka przykrywająca spódnicę		✓
Szczelina w fartuchu dla palca, aby podnieść płytkę z płaskiej powierzchni	✓
Pokrywa zawiera pierścienie wokół poszczególnych studzienek	✓	✓

Wyniki formowania sferoidów 

Formowanie sferoidów dla trzech linii komórkowych A549, HeLa i MCF7 testowano przy użyciu 96-dołkowych płytek Millicell^® ULA z dnem U i płytek Competitor A w celu monitorowania jednorodności. Aby zapoznać się z protokołem tworzenia sferoidów, obrazowania i analizy, kliknij tutaj.

Wszystkie trzy linie komórkowe z powodzeniem tworzyły sferoidy i rosły w podobnym tempie na płytkach Competitor A i Millicell^® ULA. Na obu płytkach linie komórkowe A549 tworzyły luźniejsze sferoidy, które wymagały kilku dni na zagęszczenie, zanim sferoid zaczął rosnąć. Linie komórkowe HeLa i MCF7 rosły liniowo i tworzyły sferoidy w ciągu 24 godzin od wysiania zarówno na płytkach Competitor A, jak i Millicell^® ULA.  Nie było znaczących różnic między tworzeniem sferoidów a wzrostem na płytkach.

Rysunek 2. Tworzenie sferoidów na płytkach Millicell^® ULA w porównaniu z formowaniem na płytce konkurencyjnej A. A) Komórki A549; B) Komórki HeLa; C) Komórki MCF7. Nie było znaczącej różnicy w tworzeniu sferoidów dla żadnej z linii komórkowych.

Evaluating Spheroid Roundness 

Kształt sferoidów jest ważną analizą stosowaną do oceny tworzenia sferoidów. Okrągłość sferoidy jest powszechną metodą stosowaną do ilościowego określania i analizowania kształtu sferoidy.

Aby uzyskać więcej informacji na temat obliczania okrągłości sferoidy, odwiedź nasz protokół oceny okrągłości i kolistości sferoidy.

Okrągłość sferoidów utworzonych zarówno na płytkach Millicell^® ULA, jak i na płytkach konkurencji A obliczono za pomocą wzoru na okrągłość. Korzystając z tego wzoru, idealnie okrągłe sferoidy będą miały wartość zaokrąglenia równą 1 lub bliską 1. Sferoidy utworzone zarówno na płytkach Millicell^® ULA, jak i na płytkach Competitor A miały równoważną okrągłość we wszystkich testowanych liniach komórkowych. Sferoidy na płytkach Millicell^® ULA miały wartość zaokrąglenia 1 (rysunek 3).

Rysunek 3. Obrazowanie Brightfield okrągłości sferoidów utworzonych przy użyciu płytek Millicell^® ULA i płytek konkurencyjnych A. A) Sferoid linii komórkowej A549; B) Sferoid linii komórkowej HeLa; C) Sferoid linii komórkowej MCF7; D) Ilościowa ocena okrągłości sferoidów pomiędzy płytkami Millicell^® ULA i płytkami Competitor A.

Evaluating Spheroid Circularity

Krągłość sferoidów jest również wykorzystywana w literaturze do oceny tworzenia sferoidów. Okrągłość sferoidy odnosi się do powierzchni i gładkości sferoidy. Szorstkie i wyboiste sferoidy będą miały niższą wartość kolistości niż gładkie sferoidy, a gładsze i bardziej okrągłe sferoidy będą miały wyższą wartość kolistości. Ponieważ różne typy komórek mogą tworzyć różne kształty sferoid, niektóre linie komórkowe będą miały naturalnie wyższą wartość kolistości.

Płytki Millicell^® ULA i płytki konkurenta A działały równoważnie, bez statystycznej różnicy między wartościami kolistości różnych linii komórkowych (rysunek 4). Linia komórkowa MCF7 wykazywała niższą wartość kolistości niż linie komórkowe A549 i HeLa (rysunek 4), ale było to porównywalne między płytkami. 

.

Rysunek 4. Obrazowanie jasnego pola kolistości sferoidów dla sferoidów utworzonych przy użyciu płytek Millicell^® ULA i płytek konkurencyjnych A. A) Sferoid linii komórkowej A549; B) Sferoid linii komórkowej HeLa; C) Sferoid linii komórkowej MCF7; D) Kwantyfikacja kolistości sferoidów między płytkami Millicell^® ULA i płytkami konkurenta A.