Znakowanie i wykrywanie kwasów nukleinowych
Zakres metod znakowania i wykrywania kwasów nukleinowych, produktów PCR i oligonukleotydów jest bardzo zróżnicowany. Odczynniki i metody, które są często stosowane do znakowania i wykrywania kwasów nukleinowych, są określane przez kilka czynników, w tym rodzaj cząsteczki, która będzie znakowana i dalsze zastosowanie. Następnie do znakowania kwasów nukleinowych stosowane są zarówno metody enzymatyczne, jak i chemiczne, które obejmują różne cząsteczki, takie jak fluorofory, enzymy i pierwiastki promieniotwórcze.
Powiązane artykuły techniczne
- Metody znakowania digoksygeniną (DIG) i zestawy do sond DNA i RNA DIG, znakowanie DNA z losowym primerem, znakowanie nickiem translacyjnym, znakowanie końcowe oligonukleotydów 5' i 3'.
- Bromek etydyny jest dobrze znanym i szeroko stosowanym barwnikiem fluorescencyjnym w badaniach biotechnologicznych.
- Dostępne procedury, odczynniki i sprzęt do fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH).
- Informacje ogólne i protokoły opisujące różne metody stosowane przez biologów molekularnych do wykrywania próbek białek lub kwasów nukleinowych związanych z błonami.
- Poznaj zablokowany kwas nukleinowy i MGB. Te modyfikacje oligo zapewniają stabilność i specyficzność w analizie molekularnej, co czyni je idealnymi do zastosowań badawczych i diagnostycznych.
- Zobacz wszystkie (12)
Powiązane protokoły
- There are several counterstains possible in combination with BM Purple (or NBT/BCIP in general), including FastGreen FCF and Nuclear Fast Red.
- NBT/BCIP
- NBT/BCIP Ready-to-Use Tablets Protocol Troubleshooting
- There are several counterstains possible in combination with BM Purple (or NBT/BCIP in general), for instance, FastGreen FCF or Nuclear Fast Red.
- Poznaj podstawy blottingu Northern i Southern, wraz z protokołami i aplikacjami do przenoszenia makrocząsteczek na nośniki membranowe.
- Zobacz wszystkie (18)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Nukleic Acid Labeling and Probes
Kwasy nukleinowe mogą być znakowane w całej cząsteczce lub na końcach 5' i 3'. Sondy kwasów nukleinowych są szczególnie przydatne w testach hybrydyzacji, takich jak wykrywanie RNA w northern blot lub DNA w Southern blot. W celu rozprowadzenia etykiety w sondzie stosuje się różne metody znakowania, w tym PCR ze znakowanymi dezoksynukleotydami (dNTP) lub trifosforanami nukleotydów (NTP), losowe gruntowanie i translację nicków. Znakowanie końcowe jest szczególnie przydatne w testach badających interakcje kwas nukleinowy-białko w celu uniknięcia przeszkód sterycznych.
Testy znakowania i detekcji kwasów nukleinowych
W zależności od metody znakowania, detekcja kolorymetryczna jest często stosowana w przypadku sond znakowanych enzymatycznie, podczas gdy detekcja autoradiograficzna jest odpowiednia dla sond radioaktywnych. Typowe sondy obejmują digoksygeninę (DIG) i sondy znakowane fluoresceiną i mogą być stosowane w połączeniu w celu ułatwienia wykrywania sond wielokolorowych w połączeniu z reakcjami kolorymetrycznymi (np. fosfatazą alkaliczną). Podobnie, włączenie biotyny-16-dUTP za pomocą PCR jest również możliwe w przypadku większości polimeraz DNA jako dodatkowa metoda znakowania i wykrywania. Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH) wykorzystuje sondy fluorescencyjne do wykrywania sekwencji DNA, a pomyślne wykrycie i dalsza analiza są częściowo zdeterminowane przez czułość i rozdzielczość mikroskopu fluorescencyjnego dostępnego dla badacza.
Zastosowania znakowanego DNA i RNA
Transfer makrocząsteczek na membrany fazy stałej znany jest jako blotting. Ze względu na specyficzność znakowanych sond, hybrydyzacja kwasu nukleinowego i sondy zapewnia badaczom możliwość wykrywania zarówno sekwencji DNA, jak i RNA w złożonych mieszaninach kwasów nukleinowych. Ponadto metody te pozwalają na gromadzenie dodatkowych cennych informacji, w tym analizę ekspresji genów, wielkości mRNA i liczby kopii w zależności od testu. Hybrydyzacja in situ jest również powszechnie stosowana przez naukowców do wykrywania jednej lub więcej różnie znakowanych sond (np. DIG i sond znakowanych fluoresceiną).
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?