Łączniki Fmoc SPPS

Novabiochem^® posiada jeden z najszerszych asortymentów łączników i żywic derywatyzowanych do syntezy peptydów w fazie stałej Fmoc. Właściwości tych żywic podsumowano w Tabeli 1, wraz z odnośnikami do odpowiednich protokołów ładowania i rozszczepiania.

Kwasy peptydowe

Do syntezy kwasów peptydowych stosuje się łączniki typu alkoholu benzylowego, takie jak Wang lub HMPA. Szczególną uwagę należy zwrócić na peptydy zawierające reszty Cys, His, Gly, Pro, Met i Trp na C końcu. Estryfikacja Cys i His do tych łączników jest zawsze problematyczna, ponieważ te aminokwasy są bardzo podatne na enancjomeryzację w raczej wymuszonych warunkach. Do przygotowania takich peptydów należy stosować żywice derywatyzowane łącznikami typu tritylowego, takie jak żywica NovaSyn^® TGT, NovaPEG Trt lub żywica 2-chlorotrytylowa, ponieważ ładowanie tych nośników nie wymaga aktywacji grupy karboksylowej Fmoc-aminokwasu, a zatem jest całkowicie wolne od racemizacji i tworzenia dipeptydów. Żywice na bazie trytylu są również zdecydowanie zalecane do przygotowania peptydów zawierających C-końcowe reszty Gly, Pro, Met i Trp. Dipeptydy zawierające glicynę i prolinę przyłączone do łączników na bazie alkoholu benzylowego są podatne na tworzenie diketopiperazyny podczas deprotekcji Fmoc, z utratą łańcuchów peptydowych z podłoża, podczas gdy reszty Met i Trp mogą być alkilowane przez kationy generowane na łączniku podczas reakcji rozszczepiania, co powoduje ponowne przyłączenie peptydu do podłoża. W obu przypadkach te reakcje uboczne są zmniejszone, jeśli nie wyeliminowane, z żywicami tritylowymi, ze względu na większość łącznika.

Zakres produktów Novabiochem^®  oferuje również wygodę wstępnie załadowanych żywic Wang i NovaSyn^® TGA. Żywica luzem używana do przygotowania naszych wstępnie załadowanych żywic Wang jest testowana pod kątem syntezy, aby zapewnić spójne i niezawodne działanie w syntezie. Określane są również główne zanieczyszczenia wynikające z załadowania aminokwasu, takie jak zawartość dipeptydu i racemizacja.

Zabezpieczone kwasy peptydowe

Żywice derywatyzowane łącznikami typu tritylowego, takie jak żywica NovaSyn^® TGT, NovaPEG Trt lub żywica 2-chlorotritylowa, zapewniają najprostsze podejście do syntezy zabezpieczonych kwasów peptydowych. Traktowanie 20% TFE w DCM uwalnia w pełni chronione kwasy peptydowe, z pomijalną utratą grup chroniących łańcuchy boczne, pod warunkiem, że do wprowadzenia reszt His stosuje się Fmoc-His(Clt)-OH. Po odparowaniu rozpuszczalnika produkt jest izolowany przez wytrącanie wodą.

Dostarczamy również żywicę NovaSyn^® TGT, NovaPEG Trt i żywice 2-chlorotritylowe wstępnie załadowane pierwszą resztą aminokwasową.

Amidy peptydowe

Żywice oparte na łączniku Fmoc-Rink Amide, takie jak Rink Amide AM lub Rink Amide MBHA, są zalecane do rutynowej syntezy amidów peptydowych. Na ładowanie końcowej reszty C można wpływać przy użyciu dowolnej standardowej metody sprzęgania. Amidy peptydowe są uwalniane przez traktowanie 95% koktajlami rozszczepiającymi TFA.

Zabezpieczone amidy peptydowe

Żywica Sieber Amide oferuje najbardziej praktyczną drogę do zabezpieczonych amidów peptydowych. Aminokwas C końcowy jest ładowany na żywicę przy użyciu standardowych metod sprzęgania. Traktowanie 1% TFA w DCM uwalnia chroniony amid peptydowy.

N-alkiloamidy peptydowe

Najprostsze podejście obejmuje redukcyjne aminowanie odpowiedniej aminy pierwszorzędowej do żywicy FIA AM, w celu wytworzenia aminy drugorzędowej związanej z żywicą. Acylowanie tej grupy z C końcową resztą peptydu, przedłużenie łańcucha i rozszczepienie TFA, daje peptyd N-alkiloamid. W przypadku peptydowych N-metylo- i N-etyloamidów, żywice FIA-AM są dostępne wstępnie poddane derywatyzacji metyloaminą i etyloaminą.

Alkohole peptydowe

Oferujemy żywicę 2-chlorotrytylową wstępnie załadowaną glicynolem i teoninolem. Żywice te umożliwiają bezpośrednią syntezę alkoholi peptydowych zawierających te reszty na C końcu. W przypadku peptydów zawierających inne C-końcowe aminoalkohole zaleca się stosowanie żywic derywatyzowanych łącznikiem HMBA. Peptydy przyłączone do tego łącznika są rozszczepiane przez redukcję za pomocą NaBH₄ jako alkohole peptydowe.

Aldehydy peptydowe

Dostępny jest niewielki zakres aldehydów pochodzących z aminokwasów wstępnie załadowanych na żywicę Thr-Gly-NovaSyn^® . Po deprotekcji łańcucha bocznego za pomocą TFA, aldehydy peptydowe są uwalniane przez traktowanie kwasem octowym/wodą/DCM/MeOH. Aldehydy peptydowe mogą być również przygotowywane przez redukcyjne rozszczepienie z żywicy Weinreb AM. W przypadku syntezy na większą skalę, utlenianie chronionych alkoholi peptydowych za pomocą IBX lub odczynnika Dess-Martin w roztworze zapewnia najbardziej efektywną metodę

Estry peptydowe

Syntezę estrów metylowych peptydów na małą skalę można osiągnąć poprzez metanolizę peptydów przyłączonych do łącznika HMBA. Jednakże, wydajność jest często niska, a produkty zanieczyszczone kwasem peptydowym. Jedną z bardzo skutecznych, skalowalnych metod jest reakcja chronionego kwasu peptydowego z diazometanem TMS w MeOH. Do syntezy innych estrów zaleca się stosowanie metody BAL polegającej na zakotwiczeniu wstępnie uformowanego estru aminokwasu do żywicy formylowej.

Tioestry peptydowe

Syntezę tioestrów peptydowych na małą skalę można osiągnąć poprzez tiolizę z łączników sulfamylobutyrylowych i Dbz. W przypadku większych ilości zalecane jest sprzęganie chronionego kwasu peptydowego ze wstępnie uformowanym tioestrem aminokwasowym, a następnie deprotekcja łańcucha bocznego.

Łączniki dla Fmoc SPPS

	Żywica	Cleavage	Protokół ładowania	Protokół usuwania
Kwas peptydowy	Żywica Wang żywica NovaSyn® TGA żywica HMPA-PEGA HMPA-NovaGel™ Żywica NovaPEG Wang Żywica (4-bromometylo) polistyren fenoksy-metylowy	95% TFA	Metoda 2: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu bezwodnika symetrycznego Metoda 3: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu MSNT/MeIm	Metoda 2: Ogólne rozszczepienie TFA
Zabezpieczony kwas peptydowy .	Żywica 2-chlorotritylowa Żywica alkoholowa NovaSyn® TGT	1% TFA w DCM, AcOH/DCM/TFE, 20% TFE w DCM	Metoda 5: Ładowanie żywic tritylowych	Metoda 5: Rozszczepianie rozcieńczonym TFA Metoda 6: Rozszczepianie za pomocą TFE/DCM
.	Żywica HMPB-MBHA Żywica NovaPEG HMPB	1% TFA w DCM	Metoda 2: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu bezwodnika symetrycznego Metoda 3: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu MSNT/MeIm	Metoda 5: Rozszczepienie rozcieńczonym TFA
Karboksyamid peptydowy	Żywica NovaSyn® TGR żywica Fmoc-PAL AM żywica PAL-NovaPEG/NovaSyn® TG żywica Ramage Amide AM żywica Rink Amide żywica Rink Amide AM/MBHA żywica Rink Amide NovaGel™/ PEGA Żywica NovaPEG Rink Amide	95% TFA	Metoda 4: Przyłączanie kwasów karboksylowych do żywic aminowych	Metoda 2: Ogólne rozszczepienie TFA
Zabezpieczony karboksyamid peptydu	Żywica amidowa Sieber NovaSyn® TG Sieber	1% TFA w DCM	Metoda 4: Przyłączanie kwasów karboksylowych do żywic aminowych	Metoda 5: Rozszczepianie rozcieńczonym TFA
N-alkiloamid peptydu	Żywica metyloindolowa AM Żywica FIA AM< Żywice etyloindolowe AM	95% TFA	Metoda 4: Przyłączanie kwasów karboksylowych do żywic aminowych	Metoda 2: Ogólne rozszczepienie TFA
Ester peptydowy .	4-Fmoc-hydrazinobenzoyl AM NovaGel™	Cu(OAc)2, ROH, pirydyna	Metoda 4: Przyłączanie kwasów karboksylowych do żywic aminowych	Metoda 13: Oksydacyjne rozszczepienie żywic hydrazynobenzoilowych
	Żywica HMBA-AM HMBA-NovaGel™ Żywica HMBA-PEGA	ROH/DIPEA/DMF	Metoda 2: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu bezwodnika symetrycznego Metoda 3: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu MSNT/MeIm	Metoda 10: Rozszczepienie metanolem/DIPEA w celu otrzymania estru metylowego
Tioester peptydowy	4-Sulfamylbutyryl AM resin and others	i)TMS-CHN2 ii)RSH	Metoda 8: Ładowanie żywic sulfamylowych	Metoda 12: Ligacja tioestrów żywicami sulfamylowymi
	Żywica Dawson Dbz AM MeDdz NovaSyn®żywica TGR	i)p-NO2PhOCOCl ii)DIPEA iii)TFA	Metoda 7: Ładowanie żywic Dbz	Metoda 14: Ligacja tioestrów żywicą Dawson Dbz AM
Hydrazyd peptydowy	Żywica HMBA-AM, HMBA-NovaGel™ żywica HMBA-PEGA	NH2NH2/DMF	Metoda 2: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu bezwodnika symetrycznego Metoda 3: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu MSNT/MeIm	Method 13: Oksydacyjne rozszczepienie żywic hydrazynobenzoilowych
Alkohole peptydowe	DHP HM	95% TFA	Metoda 9: Ładowanie żywicy DHP HM	Metoda 2: Ogólne rozszczepienie TFA
	Żywica HMBA-AM HMBA-NovaGel™ żywica HMBA-PEGA	NaBH4/EtOH	Metoda 2: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu bezwodnika symetrycznego Metoda 3: Przyłączanie do żywic hydroksymetylowych przy użyciu MSNT/MeIm	Metoda 11: Rozszczepienie borohydrydem w celu otrzymania alkoholu peptydowego
Aldehydy peptydowe	H-Aaa-H NovaSyn® żywica TG	AcOH/woda/ DCM/MeOH (10:5:63:21)	Metoda 10: Ładowanie żywicy H-Thr-Gly-NovaSyn® TG	Metoda 16: Rozszczepianie żywicy H-Thr-Gly-NovaSyn® TG.