Protokoły transfekcji popularnych linii komórkowych przy użyciu odczynników do transfekcji X-tremeGENE™

Odczynniki do transfekcji X-tremeGENE™ zapewniają niezawodną transfekcję różnorodnych kwasów nukleinowych i komponentów CRISPR/Cas9, co jest kluczowym krokiem w badaniach molekularnych i komórkowych. Zapoznaj się z poniższą listą najpopularniejszych linii komórkowych, aby uzyskać szczegółowe instrukcje dotyczące korzystania z portfolio X-tremeGENE™. Szukasz maksymalnej elastyczności? Nowy odczynnik do transfekcji X-tremeGENE™ 360 jest uniwersalnym polimerem, który zapewnia doskonałą wydajność zarówno dla powszechnie stosowanych, jak i trudnych do transfekcji linii komórkowych.

• Transfection of CHO-K1 Cells
• Transfekcja komórek COS-7
• Komórki HeLa
• Komórki NIH-3T3.
• Komórki HEK-293
• PC-3 Cells
• HCT 116 Cells
• Komórki A549
• MCF-7 Cells
• HuH-7 Cells
• Komórki U-2 OS
• HepG2 Cells
• Komórki Neuro-2a
• Pierwotne komórki MEF
• Pierwotne ludzkie fibroblasty z pre-Skin
• Murine Mesenchymal Stem Cells EK8
• ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste
• komórki HEK-293T do produkcji lentiwirusów
• Komórki owadów SF9

Transfekcja komórek CHO-K1

Rozmieść komórki CHO-K1 w gęstości 1.5 X 10⁴ komórek/dołek. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-dołkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (65 - 75% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 6 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodać 2 μg plazmidowego DNA. (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 5 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentu: Komórki CHO-K1 zostały pomyślnie transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek COS-7

Rozmieść komórki COS-7 w gęstości 8.0 - 9,0 X 10³ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (75 - 85% konfluencji).

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEMR^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 6 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj  2 μg plazmidowego DNA. (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodać 5 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki COS-7 zostały pomyślnie transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek HeLa

Rozmieść komórki HeLa w gęstości 1.5 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (70 - 90% konfluencji).

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji X-tremeGENE™ 9, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 6 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodać 2 μg plazmidowego DNA.  (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 5 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentu: Komórki HeLa zostały pomyślnie transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek NIH-3T3

Rozmieść komórki NIH-3T3 w gęstości 1.5 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (70 - 80% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 6 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 2 μg plazmidowego DNA. (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 5 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki NIH-3T3 zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek HEK-293

Rozmieść komórki HEK-293 w gęstości 3.0 - 3,5 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (50 - 70% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić odczynnikowi do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 6 μLX-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 10 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki HEK-293 zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek PC-3

Rozmieść komórki PC-3 w gęstości 1.0 - 1,2 X 10⁴ komórek/basenik. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-dołkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (75 - 85% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić odczynnikowi do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA.Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodać 2 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP do rozcieńczonego DNA. (stosunek 1:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodaj 10 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki PC-3 zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek HCT 116

Rozmieść komórki HCT 116 w gęstości 3.0 - 4,0 X 10⁵ komórek/basenik. Umieść komórki w objętości 1 ml kompletnej pożywki wzrostowej na basenik w 12-dołkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (80% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 100 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj  1 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 2 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP do rozcieńczonego DNA. (stosunek 2:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodaj kompleks transfekcyjny do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Transfekcja komórek A549

Płytkę z komórkami A549 należy umieścić w gęstości 2.8 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 150 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (70% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

Umieść 500 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
Dodaj 5 μg plazmidowego DNA.

• Dodaj 10 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (Stosunek 2:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.
• Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodać 15 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Transfekcja komórek MCF-7

Płytkę z komórkami MCF-7 należy umieścić w gęstości 1,2 - 1.8 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (70 - 90% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do +15 °C  do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 6 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 2 μg plazmidowego DNA.  (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodaj 10 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki MCF-7 zostały pomyślnie transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek HuH-7

Rozmieść komórki HuH-7 w gęstości 1.0 X 10⁵ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 2,5 ml kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 6-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 100 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 1,5 μg plazmidowego DNA.  Delikatnie wymieszaj pipetą.

• Dodaj 1,5 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (stosunek 1:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.
• Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Godzinę przed dodaniem kompleksów do komórek, odświeżyć podłoże za pomocą 1,5 ml Opti-MEM I Reduced Serum Medium.
• Dodaj 100 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj studzienkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Następnego dnia odśwież podłoże za pomocą pełnej pożywki wzrostowej.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Transfekcja komórek U-2 OS

Płytka z komórkami U-2 OS o gęstości 2.5 - 3,0 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją (70 - 90% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL diluentu w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA.Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodaj 4 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP do rozcieńczonego DNA. (stosunek 2:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodać 10 μL kompleksu do transfekcji do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentu: Komórki U-2 OS zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek HepG2

Rozmieść komórki HepG2 w gęstości 2.0 - 2,5 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (60 - 70% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 500 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 30 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 10 μg plazmidowego DNA.  (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 5 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki HepG2 zostały pomyślnie transfekowane plazmidem pcDNA3.1-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek Neuro-2a

Protokół dostarczony przez klienta.
Nanieść komórki Neuro-2a na płytkę w gęstości 1,0 X 10⁵ komórek/dołek.24 godziny przed transfekcją  (30 - 40% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 100 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 8 μL odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 do rozcieńczalnika. Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodać 2 μg plazmidowego DNA. (stosunek 4:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodaj 100 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Uwaga: Dane i warunki eksperymentalne zawarte w "Protokołach dostarczonych przez klientów" są wyłączną odpowiedzialnością klientów, którzy je przesłali. Firma Roche nie była zaangażowana w ustalanie warunków eksperymentalnych ani w definiowanie kryteriów wykonywania określonych testów. W związku z tym firma Roche nie ponosi żadnej odpowiedzialności za wyniki lub interpretację wyników uzyskanych dla biologicznych parametrów docelowych opisanych przez autorów lub innych użytkowników stosujących podobne podejście eksperymentalne: Komórki Neuro-2a zostały pomyślnie transfekowane plazmidem CMV6-GFP przy użyciu X-tremeGENE™ 9 DNA Transfection Reagent.

Transfekcja pierwotnych komórek MEF

Rozmieść pierwotne komórki MEF w gęstości 0.5 - 1,0 X 10⁵ komórek/basenik. Umieść komórki w objętości 1 ml kompletnej pożywki wzrostowej na basenik w 12-dołkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją (60% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent, DNA i rozcieńczalnikowi (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzać się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 100 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 1 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 4 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (Stosunek 4:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać kompleks transfekcyjny do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Transfekcja ludzkich pierwotnych fibroblastów z pre-Skin

Płytki z ludzkimi pierwotnymi komórkami fibroblastów o gęstości 1.0 X 10⁵ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 2 ml kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 6-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (40 - 50% konfuzji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL diluentu w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 6 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodać 200 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Ludzkie pierwotne fibroblasty zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem kodującym GFP przy użyciu X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Murine Mesenchymal Stem Cells EK8

Rozmieść komórki EK8 w gęstości 3.0 X 10⁴ komórek/dołek.5 komórek/mL) w objętości 100 μL kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 96-dołkowej płytce 24 godziny przed transfekcją (50% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 392 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj  8 μg plazmidowego DNA.Delikatnie wymieszać pipetą.

Dodać 8 μl odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP do rozcieńczonego DNA. (stosunek 1:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 10 μL kompleksu transfekcyjnego do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołki lub kolby, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Transfekcja ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych

Płytki hMSCs o gęstości 8.0 X 10⁴ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 2 ml kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 6-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją (50% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 200 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 6 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (Stosunek 3:1 odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.

Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać 200 μL kompleksu do transfekcji do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wynik eksperymentu: ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem kodującym GFP przy użyciu odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP.

Transfekcja komórek HEK-293T w celu produkcji Lentiwirusa

Płytka komórek HEK-293T o gęstości 5.0 X 10⁵ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 2 ml kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 6-studzienkowej płytce 18 - 24 godziny przed transfekcją  (60 - 80% konfluencji). Inkubować hodowle komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść  180 μL diluentu w sterylnej probówce.
• Dodaj 2 μg plazmidowego DNA.  (20 μL mieszaniny plazmidowego DNA w stosunku molowym 1: 2: 2 = plazmid biblioteczny : plazmid opakowujący : plazmid otoczkowy). Delikatnie wymieszaj pipetą.

Dodaj 6 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA.(stosunek 3:1  odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszaj pipetą.

Inkubuj przez 15 - 30 minut w temperaturze od +15 °C do +25 °C.

• Dodaj 200 μL kompleksu transfekcyjnego  do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząśnij lub zawiruj dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubuj komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyniki eksperymentalne: Komórki HEK-293T zostały z powodzeniem transfekowane plazmidem pGIPZ-eGFP przy użyciu X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent.

Transfekcja komórek owadów SF9

Nałóż komórki SF9 w gęstości 0.5 X 10⁶ komórek/studzienkę. Umieść komórki w objętości 1 ml kompletnej pożywki wzrostowej na studzienkę w 12-studzienkowej płytce bezpośrednio przed transfekcją. Inkubuj kultury komórkowe przez noc.

Pozwolić, aby odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP, DNA i rozcieńczalnik (Opti-MEM^® I Reduced Serum Medium lub pożywka bez surowicy) ogrzały się do temperatury od +15 °C do +25 °C i delikatnie worteksować.

• Umieść 100 μL rozcieńczalnika w sterylnej probówce.
• Dodaj  1 μg plazmidowego DNA. Delikatnie wymieszaj pipetą.

• Dodaj 8 μL X-tremeGENE™ HP DNA Transfection Reagent do rozcieńczonego DNA. (8:1 stosunek  odczynnika do DNA). Delikatnie wymieszać pipetą.
• Inkubować przez 15-30 minut w temperaturze od +15°C do +25°C.

• Dodać kompleks transfekcyjny do komórek w sposób kroplowy.
• Delikatnie wstrząsnąć lub zawirować dołkami lub kolbami, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie na całej płytce.
• Inkubować komórki przez 24 - 72 godziny przed pomiarem ekspresji białka.

Wyłącznie do badań naukowych. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.

Prosimy pamiętać, że protokoły są sugestiami, a optymalne warunki należy określić empirycznie.

1. Przechowuj odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ 9 w temperaturze od +2 do +8 °C, a odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ HP w temperaturze od -15 do -25 °C.
2. Przenieść fiolkę zawierającą odczynnik do transfekcji DNA X-tremeGENE™ do temperatury od +15 do +25 °C i worteksować przez jedną sekundę przed usunięciem żądanej ilości.
3. Nie rozcieńczać odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™; przechowywać pozostały odczynnik do transfekcji w oryginalnych szklanych fiolkach.
4. Zminimalizować kontakt nierozcieńczonego odczynnika do transfekcji DNA X-tremeGENE™ z plastikowymi powierzchniami.
5. Po usunięciu wymaganej ilości, szczelnie zamknij pokrywkę fiolki natychmiast po użyciu.
6. Minimalna ilość X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent: DNA do użycia w transfekcji wynosi 100 μL. Tworzenie kompleksu przy niższych objętościach znacznie zmniejsza wydajność transfekcji.
7. Nie używaj probówek lub mikropłytek wykonanych z polistyrenu do przygotowania X-tremeGENE™ DNA Transfection Reagent: Przygotowanie kompleksu DNA. Jeśli nie można uniknąć materiałów polistyrenowych, należy pipetować odczynnik do transfekcji bezpośrednio do pożywki bez surowicy lub pożywki o obniżonej zawartości surowicy (która nie zawiera surowicy).
8. Nie używaj silikonowych końcówek do pipet lub probówek.
9. Upewnij się, że komórki nadal aktywnie rosną w czasie transfekcji.
10. Włącz odpowiednie kontrole podczas przeprowadzania transfekcji, włączając dołki z:
    (1) nietransfekowanymi komórkami
    (2) komórkami z samym odczynnikiem do transfekcji
    (3) komórkami z samym DNA
11. Optymalny stosunek odczynnika do transfekcji: DNA i optymalna całkowita ilość kompleksu mogą się różnić w zależności od linii komórkowej, gęstości komórek, stanu wzrostu komórek dla testu i wyrażonego genu.