Strona głównaZastosowaniaHodowla komórkowa i analiza hodowli komórkowejHodowla komórkowa według technikiTransfekcja i edycja genów
Transfekcja i edycja genów
Transfekcja to proces wprowadzania kwasów nukleinowych do komórek eukariotycznych. Komórki mogą być stabilnie transfekowane w celu integracji DNA z ich genomem lub przejściowo transfekowane w celu tymczasowej ekspresji białka. Do transfekcji komórek wykorzystywane są metody chemiczne, fizyczne i biologiczne, umożliwiające badanie funkcji i ekspresji genów w środowisku komórkowym. Zastosowania obejmują terapię genową, generowanie indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC), wyciszanie genów za pomocą interferencji RNA (RNAi) oraz produkcję terapeutycznych przeciwciał i białek.
Powiązane artykuły techniczne
- Transfekcja wprowadza materiał genetyczny do komórek, wspomagając badania nad ekspresją genów i biologią komórek.
- Browse our convenient transfection reagent selection guide to match the best reagent for your specific cell line and application needs.
- Automation is used for many applications to reduce variation caused by manual handling and to obtain reproducible results in high-throughput assays. High-throughput applications, such as knockdown studies or target screenings, often include cell transfection.
- Small inhibitory RNAs (siRNAs) have become the focus of interest in many laboratories. For the first time, these molecules offer an easy way to knock down the expression of selected genes in mammalian cells without having to resort to classical gene knockout techniques.
- Uzyskaj wskazówki dotyczące obchodzenia się z lentiwirusami, optymalizacji konfiguracji eksperymentu, miareczkowania cząstek lentiwirusów i wyboru przydatnych produktów do transdukcji.
- Zobacz wszystkie (28)
Powiązane protokoły
- Uniwersalny odczynnik do transfekcji umożliwia skuteczne dostarczanie kwasów nukleinowych do różnych komórek, kompatybilnych z różnymi warunkami hodowli komórkowej.
- Protokoły transfekcji popularnych linii komórkowych przy użyciu odczynników do transfekcji X-tremeGENE™
- Cell preparation for transfection Plate cells approx. 24 hours before transfection making sure cells are at optimal concentration (70 – 90 % confluency).
- Inkorporacja DNA do komórek eukariotycznych przy użyciu fosforanu wapnia jest powszechną metodą transfekcji. Ten protokół transfekcji może być zoptymalizowany dla wielu różnych typów komórek.
- Biuletyn produktu zawiera szczegółowy protokół użytkowania ułatwiający transfekcję DNA.
- Zobacz wszystkie (30)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Wspólne metody transfekcji
- Lipidy i liposomy: Lipidy kationowe tworzą liposomy zawierające DNA lub RNA w celu ich dostarczenia. Liposomy te łączą się z błoną komórkową i uwalniają kwas nukleinowy do komórki.
- Fosforan wapnia: Fosforan wapnia ułatwia wiązanie DNA z powierzchnią komórki, umożliwiając materiałowi genetycznemu wejście do komórki poprzez endocytozę.
- Polimery kationowe: W transfekcji opartej na polimerach, egzogenne DNA tworzy kompleksy z kationowymi polimerami, takimi jak polietylenimina (PEI), które dostają się do komórek gospodarza poprzez endocytozę.
- Transdukcja lentiwirusowa: Komórki są infekowane zmodyfikowanymi wektorami lentiwirusowymi, które przekształcają ich wirusowe RNA w dwuniciowe DNA w celu integracji z genomem gospodarza w celu dostarczenia.
- Mikroiniekcja: Komórki docelowe są najpierw umieszczane pod mikroskopem. Kwas nukleinowy jest następnie bezpośrednio wstrzykiwany do cytoplazmy lub jądra za pomocą cienkiej szklanej igły kapilarnej.
- Elektroporacja: Komórki są wystawione na działanie prądu elektrycznego o wysokim natężeniu, który destabilizuje błony, zwiększając ich przepuszczalność dla dostarczania genów.
Transfekcja jest rutynowo stosowana w technikach edycji genów i wyciszania genów, które poprawiły nasze zrozumienie złożonych procesów biologicznych i umożliwiły stosowanie terapii genowej w leczeniu chorób.
- Systemy CRISPR-Cas wykorzystują bakteryjny mechanizm obronny, który wykorzystuje genetyczne CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) w połączeniu z endonukleazami Cas (CRISPR-associated) do cięcia genomowego DNA w docelowych pozycjach i usuwania lub zastępowania genów in vivo.
- Inżynieryjne nukleazy z palcem cynkowym (ZFN) są zbudowane z domen wiążących DNA i endonukleaz oraz rozcinają DNA w docelowych miejscach w celu edycji genów.
- Odczynniki RNAi, takie jak krótkie RNA ze spinką do włosów (shRNA) i małe interferujące RNA (siRNA), ograniczają poziomy transkryptów genów w celu wyciszenia genów poprzez tłumienie transkrypcji lub aktywację procesów degradacji RNA specyficznych dla sekwencji.
Zaloguj się, aby kontynuować
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?