Protokół odczynnika do transfekcji siRNA X-tremeGENE™ i rozwiązywanie problemów

Nr produktu. SITRAN-RO

Protokuł

.Transfekcja siRNA w pierwotnych fibroblastach płuc

Roche nie posiada danych dla tego zastosowania, ale istnieje raport od klienta, krótko opisany poniżej.

Fibroblasty płuc dzikiego szczura zostały z powodzeniem poddane kotransfekcji plazmidem zawierającym czynnik wzrostu fibroblastów 2 (FGF2) i albo niespecyficznym siRNA przeciwko lucyferazie GL2, albo specyficznym siRNA przeciwko FGF2. Zastosowany stosunek wynosił 9 µL odczynnika do transfekcji X-tremeGENE™ siRNA do 1 µg kwasu nukleinowego.
Komórki zebrano 66 godzin po transfekcji i przeanalizowano metodą western blotting. Próbki transfekowane siRNA GL2 nie obniżyły poziomu ekspresji FGF2 i ß-aktyny. Specyficzny dla FGF2 siRNA indukował 45% spadek poziomu ekspresji FGF2.
Wyniki te pokazują, że odczynniki do transfekcji siRNA X-tremeGENE™ mogą być stosowane do skutecznej transfekcji (i kotransfekcji) plazmidów i siRNA do komórek pierwotnych.

siRNA, Reverse TR i plazmidy ekspresyjne na mikromacierzach transfekowanych komórek

Możliwa jest transfekcja siRNA i plazmidów ekspresyjnych na mikromacierzach transfekowanych komórek przy użyciu odczynnika do transfekcji siRNA X-tremeGENE™.

Szczegóły protokołu eksperymentalnego zostały przedstawione w artykule Biochemica: Wydajna odwrotna transfekcja zarówno siRNA, jak i plazmidów ekspresyjnych na mikromacierzach transfekowanych komórek przy użyciu odczynnika do transfekcji siRNA X-tremeGENE™.

Rozwiązywanie problemów

Precypitaty

Podczas dodawania DNA mogą wytrącać się osady, które nie są spowodowane X-tremeGENE™ siRNA Transfection Reagent. Tworzenie się osadów może być spowodowane wysokim stężeniem soli w próbce DNA. Firma Roche zaleca oczyszczanie DNA przy użyciu zestawów plazmidowych Genopure.