T1426

トリプシン ウシ膵臓由来

TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein

• 別名: Serine Protease 1
• CAS番号: 9002-07-7
• Enzyme Commission number: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-650-8
• MDL番号: MFCD00082094
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 由来生物: bovine pancreas
• 品質水準: 300
• グレード: Proteomics Grade
• 形状: essentially salt-free, lyophilized powder
• 比活性: ≥10,000 BAEE units/mg protein
• 分子量: 23.8 kDa
• 溶解性: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing
• その他の活性: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

ペプチドのトリプシン消化には、トリプシン：ペプチドに対して約1：100から1：20の比率を使用します。この製品の一般的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。基質から細胞を取り除くのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞の種類と培養期間に依存します。トリプシンは、細胞培養中の細胞の再懸濁、タンパク質の消化のためのプロテオミクス研究、および様々なゲル内消化にも使用されています。その他の用途には、膜ベースの手法による結晶化の評価や、タンパク質フォールディング速度と収量が動的トラップの存在によって制限されうることを確認する研究が含まれます。

生物化学的／生理学的作用

トリプシンは、リジンおよびアルギニン残基のC末端側のペプチドを切断します。酸性残基が切断部位の両側にある場合、この反応の加水分解速度は遅くなり、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合、加水分解は停止します。トリプシン活性の至適pHは7～9です。また、トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステルおよびアミド結合を切断するよう作用します。EDTAは、トリプシンが作用するペプチド結合を不明瞭にするカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤としてトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると、酵素活性が増加します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

構成

トリプシンは、Lys - lleペプチド結合で切断されるトリプシノーゲンからN末端ヘキサペプチドを除去することによって生成された、223アミノ酸残基の一本鎖ポリペプチドから構成されます。 アミノ酸の配列は、6個のジスルフィド架橋により架橋されています。 これは、生来型のトリプシンであるベータ-トリプシンです。 ベータ-トリプシンは自己融解し、Lys - Ser残基で開裂してアルファ-トリプシンを生成できます。 トリプシンは、セリンプロテアーゼファミリーのメンバーです。

注意

1 mM HClの溶液はアリコート中で1年間安定であり、-20℃で保存します。Ca²⁺の存在により、トリプシンの自己融解が減少し、溶液中でその安定性が維持されます。 トリプシンは、2.0 M尿素、2.0 MグアニジンHCl、または0.1%（w/v）SDS中でもその活性の大部分を保持します。

単位の定義

基質として1単位のBAEEを使用したとき、pH 7.6、25°CにおけるA₂₅₃は0.001/分となります。

調製ノート

1 mg/mLで1 mM HClにやや溶けやすくなります。
これは、TPCK処理と透析もされます。 L-1-トシルアミド-2-フェニルエチルクロロメチルケトン（TPCK）で処理すると、通常トリプシンに存在するキモトリプシン活性が低下します。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08,GHS07
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H315,H319,H334,H335
• 注意書き: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• ターゲットの組織: Respiratory system
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves