T4049

トリプシン-EDTA 溶液

0.25%, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 2.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• 別名: Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• Enzyme Commission number: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• MDL番号: MFCD00130286
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.75

特性

• 由来生物: Porcine
• 品質水準: 400
• 無菌性: sterile-filtered
• 製品種目: BioReagent
• 形状: solution
• 分子量: 23.4 kDa
• 濃度: 0.25%
• テクニック: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• 不純物: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH: 7.0-7.6
• 輸送温度: dry ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

トリプシンは、Lys - lleペプチド結合で切断されたトリプシノーゲンからN末端のヘキサペプチドを取り除いて生成された、223のアミノ酸残基から成る単一ポリペプチド鎖から構成されます。 アミノ酸配列は6つのジスルフィド結合によって架橋されます。 これは天然型トリプシンであるベータ-トリプシンです。 ベータ-トリプシンは自己分解でき、Lys - Ser残基で切断するとアルファ-トリプシンになります。 トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーのメンバーです。

アプリケーション

トリプシン-EDTA溶液は、以下の用途に使用されています：

• 高濃度サンプルの相対細胞度数評価時における、10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1640培地で培養したヒト大腸がん細胞HT29の剥離。
• 一過性にトランスフェクションしたヒト胚性腎tcA-201細胞株のトリプシン処理。
• ポリ(L/D)ラクチド96/4不織布足場および繊維のいくつかの改変処理の影響を評価するための細胞培養における、足場に接着したマウス線維芽細胞（細胞株 L929）の酵素的遊離。

フローサイトメトリー分析のために培養皿から細胞を解離させるため。シーケンシングのための単一細胞懸濁液の調製用に適しています。

本製品は一般的に接着細胞を培養表面から移動するために使用されます。 基材からの細胞の移動に必要なトリプシンの濃度は、主に細胞の種類や培養期間の長さに依存します。

生物化学的／生理学的作用

トリプシンは、リジンとアルギニン残基の C 末端側のペプチドを切断します。 この反応の加水分解速度は、切断箇所のどちらかの側に酸性残基がある場合に遅くなり、また、C 末端側にプロリン残基がある場合、加水分解は停止します。 トリプシン活性の至適 pH は 7 ～ 9 です。 トリプシンはまた、合成アミノ酸誘導体のエステルおよびアミド結合も切断できます。 EDTA は、トリプシンの作用するペプチド結合を覆い隠すカルシウムやマグネシウムイオンを中和するキレート剤として、トリプシン溶液に添加されます。 これらのイオンの除去は、酵素活性を上昇させます。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF およびアプロチニンなどを含むセリンプロテアーゼ阻害剤は、トリプシンを阻害します。

構成

トリプシン溶液（2.5 g/Lブタトリプシンおよび0.2 g/L EDTA•4Naをフェノールレッド含有ハンクス平衡塩類溶液に溶解、1倍、細胞培養試験済み）

注意

本製品は、-10°C～-40°Cで冷凍保存されます。凍結融解の繰り返しは避けてください。

調製ノート

本製品は、フェノールレッドを含みます 本製品は、ドライアイスと共に出荷されるため、パッケージ内に相当量の CO2 が蓄積することがあります。 このCO₂は、溶液内に侵入し、わずかにpHを下げ、ピンク色ではなくオレンジ色を与えます。 このオレンジ色の溶液は使用可能ですが、水酸化ナトリウムで pH を調節できます。 高濃度のトリプシンで細胞を長期間インキュベートすると、細胞膜が傷つけられ、死滅することがあります。 トリプシンの溶解や、高濃度溶液からの希釈は、Ca²⁺やMg²⁺を含まないバッファー塩溶液で実施してください。

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable