R6513

Ribonucleasi A

for molecular biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized

• Sinonimo/i: RNasi A, RNasi a, Ribonucleasi pancreatica, Ribonucleato 3′-pirimidinooligonucleotidoidrolasi
• Numero CAS: 9001-99-4
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.1.27.5 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-646-6
• Numero MDL: MFCD00132181
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.53

Proprietà

• Grado: for molecular biology
• Livello qualitativo: 300
• Forma fisica: lyophilized
• Attività specifica: ≥70 Kunitz units/mg protein
• PM: 13.7 kDa; ~13,700
• Attività estranea: Exonuclease and endonuclease, none detected; NICKase and DNase, none detected
• Temperatura di conservazione: −20°C
• InChI: 1S/C9H14N4O3/c10-2-1-8(14)13-7(9(15)16)3-6-4-11-5-12-6/h4-5,7H,1-3,10H2,(H,11,12)(H,13,14)(H,15,16); CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N

Descrizione

Descrizione generale

La RNasi A è un polipeptide a catena singola contenente 124 amminoacidi legati da quattro ponti disolfuro. Contrariamente alla RNasi B, la RNasi A non è una glicoproteina. Può essere inibita dall′alchilazione della His¹² e della His¹¹⁹ che si trovano nel sito attivo dell′enzima. I sali di potassio e di sodio sono attivatori della RNasi A.

La RNasi A è una endoribonucleasi che attacca il 3′OHfosfato di un nucleotide pirimidinico. La sequenza pG-pG-pC-pA-pG verrà scissa per ottenere pG-pG-pCp e A-pG. L′attività massima si osserva con l′RNA a singolo filamento.

La ribonucleasi A (RNasi A) è una endoribonucleasi che scinde i legami fosfodiesterici dell′RNA a singolo filamento dopo i nucleotidi pirimidinici. Attacca l′estremità 3′ fosfato (per esempio pG-pG-pC-pA-pG verrà scissa per ottenere pG-pG-pCp e A-pG). L′attività massima si osserva con l′RNA a singolo filamento. La RNasi A è un polipeptide a singola catena che contiene 4 ponti disolfuro. A differenza della RNasi B, non è una glicoproteina. Le ribonucleasi non idrolizzano il DNA, dal momento che quest′ultimo non possiede i gruppi 2′-OH essenziali per la formazione degli intermedi ciclici. La RNasi A può anche idrolizzare l′RNA da campioni proteici. La RNasi A può essere inibita dall′alchilazione di His12 e His119 e attivata da sali di potassio e di sodio. La RNasi è inibita alla presenza di ioni di metalli pesanti. La RNasi è anche inibita in modo competitivo dal DNA.

Applicazioni

• La RNasi A è usata per rimuovere l′RNA dalle preparazioni di DNA plasmidico e genomico e dai campioni proteici.
• La RNasi A è usata anche nell′analisi delle sequenze di RNA e nei saggi di protezione.
• La RNasi A è stata usata come strumento per la progettazione computerizzata di farmaci.
• La RNasi A supporta l′analisi delle sequenze di RNA.
• La RNasi A idrolizza l′RNA contenuto nei campioni proteici.
• La purificazione del DNA è supportata dalla RNasi A.

La ribonucleasi A da pancreas bovino è stata usata:

• per la purificazione di DNA plasmidico
• per digerire l′RNA a doppio filamento, evitandone la colorazione, durante la colorazione del nucleo
• in tecniche di immunoperossidasi e immunofluorescenza
• per trattare le cellule prima della citometria a flusso
• come componente del tampone di lavaggio di sezioni di tessuto FFPE post-ibridazione in situ
• per trattare le cellule durante la preparazione di estratti di proteine periferiche di membrana
• saggi di protezione da RNasi
• rimozione di RNA legato in modo non specifico
• analisi di sequenze di RNA
• idrolisi dell′RNA contenuto in campioni proteici

Caratteristiche e vantaggi

La nostra ribonucleasi A, RNasi A, a elevata stabilità, è adatta per la rimozione dell′RNA, il sequenziamento dell′RNA e la purificazione del DNA.

Risultati analitici

Proteina determinata da E.

Altre note

Gli attivatori della RNasi A includono i sali di potassio e di sodio. La RNasi A può essere inibita dall′alchilazione di His12 o His119.

Un′applicazione importante della RNasi A è la rimozione dell′RNA dalle preparazioni di DNA plasmidico. Per questa applicazione si usa una RNasi A priva di DNasi con una concentrazione finale di 10 μg/mL.

La bollitura delle soluzioni madre di questa RNasi A per inattivare la DNasi residua non è necessaria e può causare la precipitazione dell′RNasi e la possibile perdita dell′attività enzimatica. Se una soluzione di RNasi A viene riscaldata a pH neutro, se ne provoca la precipitazione. Se riscaldata a un pH inferiore, può verificarsi una precipitazione parziale a causa di impurezze proteiche presenti.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H334
• Consigli di prudenza: P261 - P284 - P501
• Classi di pericolo: Resp. Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 3
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable
• Dispositivi di protezione individuale: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)