Podwójnie znakowane sondy

Sondy podwójnie znakowane są najpopularniejszym typem sond do qPCR i są często określane jako sondy hydrolizujące.

Czytaj więcej o

• Zastosowania sond podwójnie znakowanych
• Korzyści z używania podwójnie znakowanych sond
• Dodaj zablokowany kwas nukleinowy lub MGB:EDQ do swojej sondy
  
• Jak działają podwójnie znakowane sondy.
• Cechy sond podwójnie znakowanych
• Tabela właściwości spektralnych
• Harmonogram wysyłki
• Powiązane produkty

Zastosowania podwójnie znakowanych sond

• Walidacja mikromacierzy
• Wielokrotność genów docelowych / kilka próbek
• Wykrywanie patogenów
• Multipleksowanie
• Ilościowe oznaczanie obciążenia wirusem
• Analiza ekspresji genów
• Oznaczanie kopii genów

Doskonały do walidacji MISSION^® siRNA i shRNA knockdown.

KORZYŚCI Z UŻYCIA PODWÓJNIE OZNAKOWANYCH PROB

• Prostota projektu dla specyficzności sekwencji
• Szeroka dostępność kombinacji reporter/quencher
• Zwiększona czułość

DODAJ ZABLOKOWANY KWAS NUKLEINOWY LUB MGB:EDQ DO SWOJEGO PROBE

Korzyści zablokowanego kwasu nukleinowego z BHQ™

• Zwiększona stabilność termiczna i specyficzność hybrydyzacji
• Większa dokładność w wykrywaniu SNP, rozróżnianiu alleli i in vitro kwantyfikacji lub wykrywaniu
• Łatwiejsze i bardziej czułe projekty sond dla problematycznych sekwencji docelowych 
• Nie posiada natywnej fluorescencji (emituje ciepło zamiast światła), co skutkuje niższą fluorescencją tła
• Zwiększony stosunek sygnału do szumu, zapewniający wyższą czułość
• Umożliwia szerszy wybór reporterów do multipleksowania

Korzyści MGB:EDQ

• Zwiększona specyficzność hybrydyzacji sonda-cel, zmniejszająca prawdopodobieństwo niespecyficznego wiązania
• Wyższa czułość umożliwia stosowanie krótszych sond, co zwiększa czułość testów qPCR
• Regulacja temperatury topnienia umożliwia regulację Tm sondy, co może być korzystne przy projektowaniu sond qPCR o optymalnych wartościach Tm
• Zmniejszony sygnał tła przyczynia się do zmniejszenia fluorescencji tła, co prowadzi do poprawy stosunku S:N lub stosunku sygnału do szumu
• Zwiększona stabilność może poprawić stabilność hybrydy sonda-cel, zmniejszając prawdopodobieństwo degradacji sondy
• Elastyczność projektowania rozszerza opcje projektowania sond, ułatwiając tworzenie wydajnych testów qPCR
• Ulepszone wykrywanie SNP poprzez dyskryminację niedopasowania

Jak działają podwójnie znakowane sondy

Sonda podwójnie znakowana to jednoniciowy oligonukleotyd znakowany dwoma różnymi barwnikami. Barwnik reporterowy znajduje się na końcu 5', a cząsteczka wygaszająca na końcu 3'. Cząsteczka wygaszacza hamuje naturalną emisję fluorescencji reportera poprzez transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET). Poniższa ilustracja przedstawia ten mechanizm. 

Starter jest wydłużany przez polimerazę, a sonda wiąże się z określoną matrycą DNA. Hydroliza uwalnia reporter z hybrydy sonda-cel, powodując wzrost fluorescencji. Zmierzony sygnał fluorescencji jest wprost proporcjonalny do ilości docelowego DNA.

Features of Dual-Labeled Probes

• Ilości: 1, 3, 5 i 10 OD
• Oczyszczanie: HPLC
• Długości sekwencji: 15 - 40 zasad
• Kontrola jakości: 100% spektrometria masowa
• Format: Dostarczane na sucho w bursztynowych probówkach
• Dostępne formaty niestandardowe (normalizacja, specjalne płytki itp.)

Nasze sondy są dostarczane w formacie upraszczającym planowanie eksperymentów.

Gwarantowane zyski

*Oszacowanie opiera się na 4 nmolach lub 32 µg dla 1 OD i 200 nM w 25 µL reakcji (5,0 pmol/reakcja). Oszacowanie opiera się na średniej długości sekwencji wynoszącej 25 zasad.

Gwarantowany OD Yield	Approx. No. of nmoles	Approx.µg	Approx. No.
1	4	32	800
3	12	96	2,400
5	20	160	4,000
10	40	320	8,000

Tabela właściwości widmowych

Dye	Max. EX (nm)	Max. EM (nm)	Kompatybilny Quencher
6-FAM™	495	520	BHQ™-1, TAMRA™, MGB:EDQ
JOE™	529	555	BHQ™-1, TAMRA™
TET™	521	536	BHQ™-1, TAMRA™, MGB:EDQ
Cal Fluor® Gold 5401	522	544	BHQ™-1
HEX™2	535	556	BHQ™-1, TAMRA™, MGB:EDQ
Cal Fluor® Orange 5602	538	559	BHQ™-1
TAMRA™	557	583	BHQ™-2
Cyanine 3	549	566	BHQ™-2
Quasar®&5703	548	566	BHQ™-2
Cal Fluor® Red 5904	569	591	BHQ™-2
ROX™	586	610	BHQ™-2
TxRd (Sulforhodamine 101-X)	597	616	BHQ™-2
Cyjanina 5	646	669	BHQ™-3
Quasar® 6705	647	670	BHQ™-3
Cyanine 5.5	675	694	BHQ™-3

¹JOE/TET alternatywa
²VIC^® alternatywa
³Cyanine 3 alternatywa
⁴TAMRA™ alternatywa
⁵Cyanine 5 alternatywa

Harmonogram wysyłki

*Czas dostawy może być dłuższy ze względu na tranzyt międzynarodowy, opóźnienia w odprawie celnej itp. Duże projekty zostaną umieszczone w harmonogramie dostaw w oparciu o potrzeby projektu.

Ilość (OD)	1	3	5	10
Dwukrotnie znakowane sondy ze standardowymi barwnikami	3-5 dni	3-5 dni	3-5 dni	3-5 dni
Dwukrotnie znakowane sondy kwasu nukleinowego ze standardowymi barwnikami	7 dni	7 dni	7 dni	7 dni
Dwukrotnie znakowane sondy MGB:Sondy EDQ z 6'-FAM™, HEX™ lub TET™ (zapytaj o inne barwniki)	N/A	10-12 dni	10-12 dni	10-12 dni
Dwukrotnie znakowane sondy z barwnikami po syntezie, z/bez zablokowanego kwasu nukleinowego	7-10 dni	7-10 dni	7-10 dni	7-10 dni