PCR Master Mix

Probówka reakcyjna PCR

Czytaj więcej

• Co to jest mieszanina wzorcowa PCR lub RT-PCR?
• Zastosowania mieszanin wzorcowych
• Składniki mieszanin wzorcowych
  
• Types of Master Mixes
• Commonon PCR Master Mix Recipe
• Standard PCR Master Mixes
  
• High-fidelity PCR Master Mixes
• RT-PCR Master Mixes
• qPCR Master Mixes
• Recommended PCR Master Mix Products

Co to jest PCR lub RT-PCR Master Mix?

Master mix PCR, czasami znany jako super mix lub ready mix, jest wsadową mieszaniną odczynników PCR w optymalnych stężeniach, którą można przygotować i podzielić na wiele probówek PCR lub 96-dołkowych płytek PCR. Mieszanina wzorcowa zazwyczaj zawiera polimerazę DNA, dNTP, MgCl₂ i bufor. Korzystanie z mieszaniny wzorcowej ogranicza pipetowanie i ryzyko zanieczyszczenia, jest wygodne, oszczędza czas i zapobiega możliwym błędom podczas mieszania, co czyni ją idealną do zastosowań o wysokiej wydajności.

Master mix umożliwia badaczom konfigurowanie kontroli i testowanie różnych stężeń docelowych szablonów DNA lub RNA bez konieczności indywidualnego dodawania dokładnych ilości enzymów, buforów, kofaktora (zwykle MgCl₂), wody i dNTP do każdej probówki reakcyjnej lub studzienki płytki. Zamiast tego, duża mieszanina wzorcowa zawierająca wszystkie lub większość odczynników PCR jest przygotowywana raz. Odpowiednia ilość mieszaniny wzorcowej może być pipetowana do probówek lub studzienek płytki i łączona z dowolnymi składnikami, które różnią się w zależności od reakcji, takimi jak szablony DNA lub RNA lub startery.

Reakcje PCR na dużą skalę mogą zawierać 2000 lub więcej pojedynczych reakcji o objętości od 25 μL do 50 μL. Nawet w przypadku partii 20 reakcji badacze mogą zaoszczędzić czas, zmniejszyć liczbę błędów pipetowania i poprawić spójność dzięki mieszaninie wzorcowej. Mieszanki te pozwalają uniknąć całkowitego pominięcia odczynników w reakcji, co w rezultacie daje wyniki fałszywie ujemne.

Nasz Kalkulator mieszanki wzorcowej PCR może pomóc w zaplanowaniu receptury mieszanki wzorcowej dla niestandardowej partii reakcji PCR.

Zastosowania mieszanin wzorcowych PCR

Mieszaniny wzorcowe PCR są powszechnie używane w następujących zastosowaniach:

• High-throughput PCR
• Routine PCR

Master mixy z hot start polimerazą DNA są idealne do następujących zastosowań:

• Multiplex PCR
• Redukcja dimerów starterów
• Wygodna konfiguracja w temperaturze otoczenia zgodna z automatyzacją

Laboratoria na wstępnych etapach badań mogą zmieniać szablony DNA lub RNA, jednocześnie polegając na wygodzie innych wstępnie zmieszanych składników.

Składniki mieszaniny wzorcowej PCR

• Enzym
• Bufor(y)
• Kofaktor - najczęściej stosowany jest chlorek magnezu (MgCl₂). Czasami MgSO₄ jest używany z określonymi enzymami.
• dNTP
• Primery
• Szablonowe DNA (jeśli wszystkie próbki będą jednolite)
  
• Woda wolna od nukleaz lub woda klasy PCR

Rodzaje mieszanin wzorcowych

Dostępnych jest wiele gotowych mieszanin wzorcowych PCR, które pomagają zaoszczędzić czas i uniknąć błędów w pomiarach i dozowaniu.

Większość komercyjnych mieszanin wzorcowych PCR jest przeznaczona do określonego typu PCR, takiego jak gorący start lub kompatybilna tylko z niektórymi termocyklerami. Jest to szczególnie prawdziwe w przypadku PCR w czasie rzeczywistym (znanego również jako ilościowy PCR lub qPCR), który opiera się na termocyklerze, który może wykryć postęp reakcji w oparciu o odpowiedni rozwój fluorescencji z barwnika zawartego w mieszance wzorcowej.

Komercyjne mieszanki wzorcowe nadal wymagają pewnego przygotowania przed użyciem, choćby w celu dodania matrycy DNA lub RNA. Mogą one dodatkowo wymagać rozmrożenia, schłodzenia, rozcieńczenia wodą o jakości PCR i wymieszania za pomocą pipety lub wirówki.

Oferujemy wiele mieszanek wzorcowych do PCR i PCR w czasie rzeczywistym, które są zatwierdzone dla różnych urządzeń. Nasz poręczny Przewodnik wyboru PCR może pomóc w zidentyfikowaniu odpowiedniej mieszaniny wzorcowej lub składników do stworzenia własnej mieszaniny. Przedstawiliśmy również kilka naszych najlepiej sprzedających się mieszanek wzorcowych PCR według stylu PCR:

• Standard PCR
• High-Fidelity PCR
• RT PCR
• qPCR

Commoned PCR Master Mix Recipe

Podstawowy przepis na mieszankę wzorcową PCR.

Objętość	Składnik	Stężenie końcowe
5 µL	10X Bufor PCR	1X
1 µL	dNTPs (10 mM)	200 µM
1 - 2 µL	Forward primer	50 - 100 pmol
1 - 2 µL	Reverse primer	50 - 100 pmol
0.5 - 1 µL	Polimeraza DNA Taq (5U/µL)	2.5 - 5 U
1 - 5 µL	Template DNA	1 - 200 ng
1 µL	MgCl2 (50 mM)	1 mM
Zmienna	Woda	Dodaj do q.s. do 50 µL
50 µL	Objętość całkowita

Przygotowanie komercyjnej mieszaniny wzorcowej

Należy pamiętać, że ten typowy przepis różni się w zależności od mieszaniny i konkretnego zastosowania. Należy zapoznać się z dostarczoną literaturą produktu dla konkretnej mieszaniny wzorcowej lub gotowej mieszaniny.

Objętość	Składnik	Stężenie końcowe
25 µL	2X Master Mix	1X
1 µL	Starter do przodu	50 pmol &
1 µL	Starter odwrotny	50 pmol
1 - 5 µL	Szablon DNA	1 - 200 ng
17 - 22 µL	Woda	Dodać do q.s. do 50 µL
50 µL	Całkowita objętość

Standardowe mieszanki wzorcowe PCR

ReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix with MgCl₂

ReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix to przygotowany roztwór zawierający wszystko, co potrzebne do reakcji PCR, z wyjątkiem specyficznych starterów i matrycy. Mieszanka zawiera naszą wysokiej jakości polimerazę Taq, 99% czystych deoksynukleotydów i bufor w 2× zoptymalizowanym koncentracie reakcyjnym.

Roche PCR Master

Roche PCR Master zawiera wszystkie odczynniki wymagane do przeprowadzenia standardowej reakcji PCR. Wszystko, co należy dodać, to matryca DNA, startery i wymagana ilość wody.

REDTaq^® ReadyMix™ PCR Reaction Mix

.Ta mieszanina łączy w sobie wydajność i zalety naszej polimerazy DNA REDTaq^® z wygodą mieszaniny reakcyjnej ReadyMix™ PCR. REDTaq^® ReadyMix™ to gotowa do użycia mieszanina polimerazy DNA Taq , 99% czystych dezoksynukleotydów, buforu reakcyjnego i obojętnego czerwonego barwnika w koncentracie 2X.

High-Fidelity PCR Master Mixes

Roche High-fidelity PCR Master

Wybierz wygodny High-fidelity PCR Master, podwójnie skoncentrowaną, gotową do użycia mieszaninę, która łączy system Expand High Fidelity PCR z dNTP klasy PCR, MgCl₂ i zoptymalizowanym buforem reakcyjnym.

Millipore KOD Hot Start Master Mix

.Jest to gotowa do użycia 2-krotna mieszanina zawierająca polimerazę DNA KOD Hot Start, dwa przeciwciała monoklonalne, ultraczyste dezoksynukleotydy i bufor reakcyjny z MgSO₄. Mieszanina ta jest zoptymalizowana pod kątem wygodnej reakcji PCR o wysokiej wierności.

RT-PCR Master Mixes

Roche Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit został zaprojektowany do odwrotnej transkrypcji RNA ze zwiększoną wiernością w porównaniu do innych odwrotnych transkryptaz. Zestaw zawiera odwrotną transkryptazę Transcriptor High Fidelity, mieszankę rekombinowanej odwrotnej transkryptazy i enzymu pośredniczącego w korekcie, zoptymalizowaną pod kątem dwuetapowego RT-PCR.

SYBR^® Green Quantitative RT-qPCR Kit zapewnia wysoce czułą metodę ilościowej analizy ekspresji genów. Nasz QRT-PCR ReadyMix™ łączy zalety M-MLV RT i JumpStart Taq w wygodnej gotowej mieszance.

KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ odczynnik jest gotową do użycia, wysoce czułą mieszaniną wzorcową do ilościowego PCR z odwrotną transkrypcją (RT-qPCR) szablonów RNA przy użyciu sond hybrydyzacyjnych takich jak TaqMan^® 5'-hydrolizujące sondy w systemach PCR w czasie rzeczywistym (patrz sekcja kompatybilności urządzeń, aby wybrać odpowiedni odczynnik dla danego urządzenia).

MystiCq^® microRNA cDNA Synthesis Mix zawiera wszystkie składniki niezbędne do przekształcenia dojrzałych mikroRNA w szablony cDNA do qPCR. Zestaw ten ma oddzielne etapy poliadenylacji i odwrotnej transkrypcji, co umożliwia optymalizację protokołu, jeśli to konieczne.

Real Time qPCR Master Mixes

Probe-based qPCR

The FastStart TaqMan® Probe Master firmy Roche to gotowa do użycia, 2× skoncentrowana mieszanina wzorcowa, która zawiera wszystkie odczynniki (z wyjątkiem starterów, sondy i matrycy) potrzebne do przeprowadzania ilościowych testów wykrywania DNA w czasie rzeczywistym, w tym qPCR i dwuetapowego qRT-PCR, w formacie wykrywania sondy hydrolizy.

Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) to gotowa do użycia, 2× stężona mieszanina wzorcowa PCR, która zawiera wszystkie odczynniki (z wyjątkiem starterów, sond i matrycy) potrzebne do przeprowadzania ilościowych reakcji PCR w czasie rzeczywistym z sondą hydrolizy. Zawiera specjalny barwnik referencyjny ROX, dzięki czemu nadaje się do wszystkich urządzeń czasu rzeczywistego, w których do analizy ilościowej wymagany jest barwnik referencyjny ROX.

SYBR^® Green PCR

SYBR^® green master mixes są odpowiednie do PCR w czasie rzeczywistym. Wykorzystują one asymetryczny barwnik cyjaninowy. Naszą najpopularniejszą mieszanką SYBR^® green jest Roche's FastStart SYBR^® Green. FastStart SYBR^® Green Master to gotowa do użycia mieszanka odczynników, która upraszcza przygotowanie reakcji do qPCR i dwuetapowego qRT-PCR z wykorzystaniem barwnika interkalującego SYBR^® Green I do wykrywania i analizy DNA.

Odczynniki KiCqStart^® qPCR ReadyMix™

KiCqStart^® qPCR ReadyMix™ są dostarczane w postaci gotowej do użycia w skoncentrowanym formacie. Zawierają bufor, stabilizatory i gorący start Taq. Można ich używać w protokołach szybkich lub konwencjonalnych cykli na dowolnym termocyklerze. Wybierz spośród SYBR^® zielonych lub opartych na sondach mieszanin.

Mieszanina wzorcowa KiCqStart^® SYBR^® Green qPCR ReadyMix™ jest kompatybilna z systemami Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett i Roche. Składniki obejmują bufor reakcyjny 2× zawierający zoptymalizowane stężenia MgCl₂, dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), KiCqStart^® Taq DNA Polymerase, SYBR^® Green dye i stabilizatory.

Low ROX™ współpracuje z Low ROX™ dla instrumentów ABI i Stratagene.

Odczynniki LuminoCt™ qPCR

Oparte na wysoce zoptymalizowanej chemii ReadyMix™, odczynniki LuminoCt™ qPCR zapewniają niezrównaną szybkość testów bez poświęcania dokładności, precyzji lub czułości. A co najlepsze, odczynniki LuminoCt™ bezproblemowo współpracują z większością urządzeń qPCR, dzięki czemu optymalizacja warunków reakcji jest ograniczona do absolutnego minimum. Często użytkownicy mogą po prostu wybrać zestaw, zbudować test i rozpocząć pracę. Generowanie najlepszych możliwych danych qPCR nigdy nie było szybsze ani łatwiejsze.

The LuminoCt™ SYBR^® Odczynnik Green qPCR ReadyMix™ został zaprojektowany w celu zapewnienia niezrównanej szybkości testu bez poświęcania dokładności, precyzji lub czułości. Rozbudowany projekt i walidacja chemii ReadyMix™ praktycznie wyeliminowały potrzebę optymalizacji, gdy odczynnik LuminoCt™ jest używany w połączeniu z odpowiednio zaprojektowanymi starterami. Włączenie przeciwciała JumpStart™ Taq do odczynnika ReadyMix™ eliminuje aktywność polimerazy w temperaturach otoczenia, nie powodując problemów z wydajnością związanych z chemicznie modyfikowanym gorącym startem Taq.

Zestaw  LuminoCt™ qPCR ReadyMix™ został zaprojektowany do wykonywania testów qPCR opartych na sondach na powszechnie dostępnych platformach instrumentów czasu rzeczywistego. Odczynnik ReadyMix™ wymaga dodania barwnika referencyjnego (dostarczonego w zestawie), gdy jest używany na instrumentach czasu rzeczywistego, które wymagają pasywnego barwnika referencyjnego ROX do normalizacji testów qPCR.

Zalecane produkty Master Mix