Antybiotyki w protokole kultur tkankowych roślin
Ogólnie rzecz biorąc, antybiotyki wymagają przechowywania w lodówce lub zamrażarce. Aminoglikozydy (np. kanamycyna) są higroskopijne i powinny być przechowywane w eksykatorze. Przechowywanie wielu sproszkowanych antybiotyków w temperaturze -20 °C nie jest zalecane i zwiększa ryzyko kondensacji wody. Wszystkie antybiotyki należy chronić przed bezpośrednim działaniem promieni słonecznych. Ryfampicyna i amfoterycyna B są bardzo wrażliwe na światło i powinny być przechowywane w ciemności.
Na etykietach pojemników z antybiotykami zwykle podawana jest aktywność (moc, substancja czynna na ilość proszku) produktu w µg/mg lub jednostkach/mg proszku. Ilość proszku do użycia dla danego antybiotyku będzie się zmieniać w zależności od aktywności produktu. Na przykład, jeśli produkt ma aktywność 1000 jednostek/mg, wymagane będzie dwa razy więcej proszku niż w przypadku tego samego produktu o aktywności 2000 jednostek/mg.
Zależność między masą (mg) antybiotyku do użycia, aktywnością proszku (µg/mg lub jednostki/mg), objętością roztworu do przygotowania (ml) i stężeniem (µg/ml) antybiotyku pożądanego w roztworze jest następująca:
Waga = (Objętość x Stężenie) / Aktywność
Większość roztworów antybiotyków pozostanie stabilna przechowywana w temperaturze -0 °C przez okres do 3 miesięcy. Jednak ryfampicyna powinna być świeżo przygotowana do każdego użycia. Większość antybiotyków jest labilna termicznie i powinna być sterylizowana przez filtrowanie przy użyciu membran minimalizujących adsorpcję (np. octan celulozy).
Preparaty wybranych antybiotyków
Preparat nystatyny (Nr produktu. N6261)
Nystatyna jest środkiem przeciwgrzybiczym wytwarzanym z Streptomyces spp. Wykazuje działanie grzybobójcze i fungistatyczne po przygotowaniu w postaci wodnej zawiesiny. Nystatyna jest tylko słabo rozpuszczalna w wodzie i alkoholu. Aseptyczne zawiesiny można przygotować poprzez sterylizację powierzchniową proszku w niewielkiej ilości dimetylosulfotlenku (DMSO) (w celu zwilżenia proszku), a następnie zawieszenie proszku w sterylnej wodzie. Procedura ta powinna być wykonywana w warunkach aseptycznych przy użyciu sterylnego sprzętu (szkło itp.)
Preparaty nystatyny są labilne termicznie. Wodne zawiesiny należy przechowywać w temperaturze -0 °C i chronić przed światłem. Zawiesiny nystatyny powinny mieć pH około 6,5-8,0 i rozkładają się przy pH poniżej 2,0 lub powyżej 9,0.
Aby uniknąć problemów z rozpuszczalnością nystatyny, można wybrać gotowy roztwór nystatyny (N9150) lub rozpuszczalną w wodzie zawiesinę nystatyny (N6803).
Preparat karbenicyliny (Nr produktu. C3416)
Karbenicylina to biały lub prawie biały, higroskopijny proszek rozpuszczalny w wodzie lub alkoholu. Karbenicylina jest najbardziej skuteczna przeciwko bakteriom Gram-ujemnym, ale może mieć również pewien wpływ na bakterie Gram-dodatnie. Wodne roztwory karbenicyliny są stabilne do 24 godzin w temperaturze pokojowej i do 72 godzin, gdy są przechowywane w temperaturze 0-5 °C.
Cefotaxime Preparation (Product No. C7039)
Cefotaksym jest proszkiem o barwie od białej do białawej, który jest łatwo rozpuszczalny w wodzie. Różnice w kolorze świeżo przygotowanych roztworów niekoniecznie wskazują na zmiany w sile działania. Produkt należy przechowywać w szczelnym pojemniku chroniącym przed światłem. Wodne roztwory cefotaksymu o pH 4,3-6,2 są stabilne przez 14-21 dni, gdy są przechowywane w temperaturze 0-5°C. Cefotaksym jest najbardziej skuteczny przeciwko bakteriom Gram-ujemnym.
Sól dwusiarczanowa G418 (Nr produktu. G1279)
Chociaż jest spokrewniony z gentamycyną, Sól dwusiarczanowa G418 nie jest zwykle stosowana jako standardowy antybiotyk. Jego najczęstszym zastosowaniem jest biologia molekularna jako środek selekcyjny. Sól dwusiarczanowa G418 jest toksyczna dla bakterii, drożdży, pierwotniaków, robaków i komórek ssaków. Odporność jest nadawana przez jeden z dwóch dominujących genów pochodzenia bakteryjnego, które mogą ulegać ekspresji w komórkach eukariotycznych.
Sól dwusiarczanowa G418 jest rozpuszczalna w wodzie i może być przechowywana w temperaturze pokojowej nawet przez 1 rok. Roztwory wodne powinny być przechowywane w stanie zamrożonym. Ilość soli dwusiarczanowej G418 wymagana do selekcji będzie się różnić w zależności od typu komórek i cyklu wzrostu. Chociaż komórki, które się namnażają, zostaną dotknięte wcześniej niż te, które nie są, komórki, które są w fazie logarytmicznej, nadal będą wymagały od 3 do 7 dni na selekcję.
Hygromycyna B (Nr produktu. H9773)
Hygromycyna B jest antybiotykiem aminoglikozydowym, który jest skuteczny przeciwko prokariotycznym i eukariotycznym mikroorganizmom i komórkom. Podobnie jak sól dwusiarczanowa G418, jej najczęstszym zastosowaniem jest biologia molekularna jako środek selekcyjny. Komórki owadów i ssaków transformowane genem hph, który koduje fosfotransferazę higromycyny B, są oporne na higromycynę B. Higromycyna B jest dostarczana w postaci proszku. Zalecany zakres stężeń do stosowania jako środek selekcyjny wynosi 10-400 µg/ml.
Prokarionty - 100 µg/ml
Niższe eukarionty - 200 µg/ml
Wyższe eukarionty - 150-400 µg/ml
W celu uzyskania bardziej szczegółowych informacji na temat zastosowania należy zapoznać się z odpowiednimi źródłami naukowymi.
XX = Skuteczny przeciwko większości gatunków
X = Skuteczny wobec niektórych gatunków
1Klucz zastosowania: CC = hodowla kalusa; PR = regeneracja roślin; EC = hodowla liścieni, hipokotyli lub tarczek liściowych;
TS = selekcja transformantów; SSC = hodowla części łodygi; PC = hodowla protoplastów; TEC = hodowla eksplantatów bulw;
STM = mikrorozmnażanie wierzchołków pędów
XX = Skuteczny przeciwko większości gatunków
X = Skuteczny przeciwko niektórym gatunkom
1Klucz zastosowania.= Skuteczny wobec niektórych gatunków
1Klucz zastosowania: CC = hodowla kalusa; PR = regeneracja roślin; EC = hodowla liścieni, hipokotyli lub tarczek liściowych;
TS = selekcja transformantów; SSC = hodowla części łodygi; PC = hodowla protoplastów; TEC = hodowla eksplantatów bulw;
STM = mikrorozmnażanie wierzchołków pędów
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?