Środki żelujące - Protokół kultury tkanek roślinnych

• Preparat z alginianu, Agargel i Phytagel
  
• Opis i zastosowanie produktów agarowych

Agar jest od dawna stosowany do zestalania pożywek do hodowli tkanek roślinnych. Rodzaj użytego agaru lub środka żelującego może wpływać na wzrost tkanki w kulturze. Zarówno czystość, jak i koszt środka żelującego są ważnymi czynnikami w każdej operacji badawczej lub produkcyjnej. Rozszerzyliśmy naszą linię środków żelujących, aby umożliwić większy wybór w wyborze środka żelującego przetestowanego w hodowli komórek roślinnych dla konkretnych wymagań. W tabeli poniżej wymieniono niektóre kryteria, które mogą pomóc w wyborze odpowiedniego produktu do danego zastosowania.

Preparat alginianowy, Agargel i Phytagel

Preparat alginianowy (Nr produktu. A0682)
Kwas alginowy został użyty jako fizyczne podłoże podobne do agarozy i do przygotowania kulek, w których osadzone są unieruchomione komórki zawiesiny i protoplasty (Adaoha Mbanaso i Roscoe, 1982; Chie i Cantliffe, 1989; Draget et al., 1988; Larkin et al., 1988). Wodne roztwory alginianu tworzą żel w temperaturze pokojowej w obecności pewnych kationów, zwłaszcza wapnia. Ta żelowa matryca może być relikwidowana przez dodanie środków chelatujących (np. cytrynianu). Komórki uwięzione w kulkach alginianowych są łatwe do manipulowania z mniejszym prawdopodobieństwem fizycznego uszkodzenia podczas przenoszenia.

Alginian powinien być przygotowany w stężeniu 1,75-4,0% (w/v) w buforowanej pożywce o niskiej zawartości wapnia (np. 2 mM) zawierającej odpowiednie osmoticum. Po wymieszaniu do całkowitego rozpuszczenia, roztwory alginianu mogą być sterylizowane filtrem (0,45 µm) lub autoklawowane. Jednakże Larkin et al. (1988) zauważyli zmniejszenie wydajności tworzenia kulek wraz ze wzrostem czasu autoklawowania. Protoplasty są zagęszczane przez odwirowanie w pożywce o niskiej zawartości wapnia i dodawane do alginianu w odpowiedniej gęstości (np. 1 x 10⁵). Roztwór alginianu protoplastów dodaje się kroplami do roztworu zawierającego 50 mM CaCl₂ i odpowiednie osmoticum. Każda kropla utworzy kulkę. Kulki powinny pozostać w roztworze CaCl₂ do 45 minut, aby zapewnić całkowite zżelowanie.

Przygotowanie Agargel™ (Nr produktu. A3301)
Agargel to mieszanka agaru i Phytagel™, która została opracowana, aby pomóc kontrolować witryfikację w kulturach tkanek roślinnych. Produkt ten zapewnia pozytywne cechy obu produktów i jest lepszy od Phytagelu, gdy problemem jest witryfikacja. Stanowi również ekonomiczną alternatywę dla agaru. Agargel wytwarza półprzezroczysty żel, który umożliwia lepsze wykrywanie zanieczyszczeń. Produkt powinien być stosowany w stężeniu 3,5-5,0 g/L, w zależności od pożądanej siły żelu.

Phytagel™ Preparation (Product No. P8169)
Phytagel jest substytutem agaru produkowanym z substratu bakteryjnego składającego się z kwasu glukuronowego, ramnozy i glukozy. Tworzy przejrzysty, bezbarwny żel o wysokiej wytrzymałości, który pomaga w wykrywaniu skażenia mikrobiologicznego. Phytagel stanowi ekonomiczną alternatywę dla agaru jako środka żelującego. Phytagel należy stosować w stężeniu 1,5-2,5 g/l. Aby zapobiec zbrylaniu, Phytagel należy dodawać do szybko mieszającego się podłoża hodowlanego, które ma temperaturę pokojową.

Opis i zastosowanie produktów Agar

Product No.	Opis	Zastosowanie	Temperatura żelowania 0C	pH przy 1.5%	Zawartość popiołu	Typowa analiza ICP (%)
						Ca	Mg	K	P	Na
A1296	Agar	Agar ogólnego przeznaczenia dla większości potrzeb badawczych i produkcyjnych.	32-35	7.0-7.5	2-5%	0.30	0,10	0,01	0,01	0.5
A6686	Agar Bakteriologiczny	Agar klasy bakteriologicznej do większości prac mikrobiologicznych.	32-39	6,5-7,5	3-7%	0,17	0.09	0.80	-	3.1
A4550	Agar typu A	Agar ogólnego przeznaczenia; dobry agar bakteriologiczny.	26-28	7,2-7,7	5-6%	0,01	0,01	0.1	0.17	1.8
A4675	Agar typu E	Agar ogólnego przeznaczenia; Stosować w ilości 5-10 g/L.	26-28	7.5-8.0	3-4%	0.02	0.02	0.07	0.13	1.2
A4800	Agar Typ M	Agar ogólnego przeznaczenia; Stosować przy 5-11 g/L.	34-36	7.0-7.5	3-6%	0.09	0,14	0,07	0,01	1.4
A9799	Agar High Gel Strength	Używaj, gdy wymagany jest mocniejszy żel.	34-37	6.5-7.0	3-4%	0.03	0,00	0,07	0,09	0.72
A7921	Agar oczyszczony	Agar o wysokiej czystości do badań i hodowli protoplastów.	30-35	6.5-7.0	2.0%	0.02	0.01	0.01	0.01	0.35
A8678	Agar Washed	Agar o wysokiej czystości do badań i hodowli protoplastów. Przygotowywany w serii płukań wodą oczyszczoną i rozpuszczalnikiem. Stosować w ilości 6-10 g/L.	25-27	7,0-7,5	2,2%	0,15	0.08	-	-	0.38
A9045	Agaroza	Agaroza o niskiej temperaturze żelowania i doskonałej klarowności.	26-30	7.0-8.0	<1%	-	-	-	-	-
A0682	Kwas alginowy	Kwas poliuronowy tworzący żele. Doskonały produkt do posiewów protoplastów lub zawiesin komórkowych.	-	-	-	0.17	0.01	2.3	-	10.1
A3301	Agargel™	Mieszanka agaru i Phytagelu oferująca pozytywne aspekty obu produktów. Tworzy półprzezroczysty żel. Stosować w ilości 3,5-5,0 g/L.	26-28	7,2-7.7	4-5%	0,25	0,06	0,04	0.08	1.05
P8169	Phytagel™	Produkuje przezroczysty, bezbarwny żel o wysokiej wytrzymałości.	27-31	6,5-7,0	9,5%	0.85	0,35	1,70	0,15	0,45