細胞分散用試薬
上皮細胞などの接着細胞の場合は、本来の環境を再現するために、通常、組織培養処理済みの表面に播種します。表面に接着した細胞は、生存および増殖します。 増殖、計数および下流の分析のためには、接着細胞および固形組織の細胞を分散させて、懸濁液を作製しなければなりません。 細胞数の計測、継代培養用の再播種および細胞アッセイ／分析のためには単細胞浮遊液が必要です。
分散用試薬には、天然に存在する酵素またはより穏やかな非酵素代替品が含まれる場合があります。これらの試薬は、カルシウムをキレート化してカドヘリンが表面または相互に付着するのを防ぎ、培養プロセス中に表面から細胞を引き離すことによって機能します。細胞培養ワークフローで使用される細胞分散用試薬は、細胞外マトリックス(ECM)基質に特異的な場合があります。
私たちの細胞分散用試薬の包括的なコレクションには以下が含まれます：
トリプシン、組換えトリプシン、StableCell™トリプシン
セリンプロテアーゼの1種であるトリプシンは、最も一般的な剥離酵素であり、接着細胞株や組織を分散するために用いられます。これらのアプリケーションでは、通常、未精製のトリプシン製品の効率のほうが高いですが、細胞を高濃度のトリプシンで処理する、あるいは処理時間が長すぎると、細胞膜が損傷されるリスクがあり、細胞が死ぬ可能性もあります。通常、培養細胞を培養基質から分離する場合は、トリプシンとEDTA（エチレンジアミン四酢酸）を併用することが最も一般的ですが、この場合のトリプシン濃度は0.025%～0.5%の範囲です。
StableCell™トリプシン溶液は、分注、凍結および解凍の必要なしで、標準的なトリプシン溶液と同様の細胞剥離ができるように開発されました。これにより、トリプシンを分注したり、細胞継代や実験のためにトリプシンが解凍するのを待つ必要がなくなるため大幅に時間が節約され、また、ラボの冷凍庫の貴重なスペースが解放されます。StableCell™トリプシン溶液は、2～8℃で保存することを推奨しますが、私たちの検証では、StableCell™トリプシンは37℃で保管した場合でも90%を超える活性と性能を保つことが示されています。
コラゲナーゼおよびディスパーゼ
コラゲナーゼは、天然型の3本ヘリックス型コラーゲンのペプチド結合を切断します。そのユニークな天然型コラーゲンの加水分解能力により、コラゲナーゼは動物組織から細胞を分離するために広く用いられています。コラゲナーゼは、さまざまな微生物および多くの動物細胞に見られます。最も強力な”クルード”コラゲナーゼは、嫌気性細菌のClostridium histolyticum （ヒストリチクム菌）により分泌されます。
ディスパーゼは、迅速で効率的、緩やかな中性プロテアーゼで、培養液中の基底層から上皮細胞層をそのまま分離することができます。ディスパーゼ I は、肺組織の酵素処理や浮遊細胞の染色プロセスで用いられるだけでなく、マウスCD4 T細胞の単離にも使用されています。
特殊な培養のための分散用試薬
穏やかな酵素処理が必要な細胞の分散や組織の剥離のために、Accutase™およびAccumax™溶液は低濃度で有効な酵素溶液です。これらの溶液の特長は以下のとおりです：
- 胚性幹細胞および神経幹細胞を効率よく剥離
- 穏やかな剥離で、生きた細胞を保護し、細胞の収率を高める
- 中和は不要
単一細胞分析
単一細胞分析では、組織サンプルを扱う際のインプットとして生存可能な単一細胞が必要です。このような分析を行うことで、研究者は幹細胞、免疫学、がん研究のための細胞培養集団の変動を研究できます。プロトコルの最適化、ベストプラクティスの作成、および信頼できる単一細胞分析データの確保に不可欠なメルクの高品質細胞分散用試薬をご覧ください。
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