DN25

Desoxirribonuclease I

lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein

• Sinônimo(s): Desoxirribonuclease, DNase I, Desoxirribounucleato 5′-oligonucleotídeo-hidrolase
• Número CAS: 9003-98-9
• Número da licença da enzima: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-667-0
• Número MDL: MFCD00130918
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: bovine pancreas
• Nível de qualidade: 300
• Formulário: lyophilized powder
• atividade específica: ≥400 Kunitz units/mg protein
• peso molecular: ~31 kDa
• composição: Protein, ≥85%
• técnica(s): DNA extraction: suitable
• solubilidade: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
• adequação: suitable for molecular biology
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• atividade externa: RNase ≤0.02%
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A DNase I, ou desoxirribonuclease I, é uma endonuclease isolada do pâncreas bovino.

• Nossa DNase I digere DNA de fita simples e dupla-fita em oligonucleotídeos e mononucleotídeos.
• A DNase pancreática bovina existe em quatro isoformas enzimáticas, tendo pontos isoelétricos para A, B, C e D: 5,22, 4,96, 5,06 e 4,78.3. A forma predominante é a A, com quantidades menores de B e C, e apenas uma quantidade insignificante de D.
• A estrutura da DNase I é similar à da exonuclease III. Ela contém duas folhas ß centrais. Cada folha β é composta por seis fitas β. Esse complexo de folhas β está cercado por extensas regiões de alça e hélices α. Essa enzima tem estrutura semelhante à da exonuclease III.^[1]

Aplicação

• Diminui a viscosidade, proporcionando melhores rendimentos pela remoção de DNA no isolamento de células primárias:
• Incorporação de bases marcadas ao DNA: Corte (“nick”) no DNA
• Marcação radioativa
• Aplicações de bioprocessamento: Remoção de DNA
• Eliminação de DNA genômico de preparados de RNA antes da realização de RT-PCR
• transcrição in vitro
• Tradução de cortes (“nicks”)
• “Footprinting” de DNase
• Regulação da polimerização da actina em células e na apoptose celular
• Reticulação UV de proteínas a ácidos nucleicos
• A DNase desempenha um papel na regulação da polimerização da actina em células e está envolvida no processo de apoptose ^[1]

Usado para remoção de DNA de amostras proteicas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A Dnase I é uma endonuclease que atua nas ligações de fosfodiéster adjacentes às pirimidinas para produzir polinucleotídeos com terminações 5′-fosfato. Na presença de Mg²⁺, a DNAse I cliva cada fita de DNA de modo independente, sendo os sítios de clivagem aleatórios. Ambas as fitas de DNA são clivadas aproximadamente no mesmo sítio na presença de Mn²⁺. Cátions divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ e Zn²⁺ são ativadores da enzima. Um concentração 5 mM de Ca²⁺ estabiliza a enzima contra digestão proteolítica. O pH ideal é de entre 7 e 8. A DNAse I do pâncreas bovino consiste em 4 componentes cromatograficamente distinguíveis, A, B, C e D, com suas razões molares de 4:1:1, respectivamente. Apenas quantidades insignificantes de D são encontradas. Os compostos 2-mercaptoetanol, quelantes, dodecilsulfato de sódio (SDS) e actina são inibidores conhecidos da atividade da enzima.

Características e benefícios

Nossa desoxirribonuclease DNase I é, essencialmente, um produto isento de RNases, o que apoia a aplicação do produto.

Definição da unidade

Uma unidade Kunitz produzirá uma mudança no A₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml em pH 5,0 a 25 °C, usando DNA, tipo 1 ou III, como substrato.

forma física

A preparação bruta contém cloreto de cálcio

Nota de preparo

A solução de 10 mg/ml de DNAse I em 0,15 M de NaCl pode perder <10% de sua atividade quando armazenada por uma semana em alíquotas a −20 °C. As mesmas soluções, quando armazenadas em alíquotas a 2-8 °C, podem perder aproximadamente 20% da sua atividade. Ela permanece ativa por até cinco horas a 60 °C, em pH entre 5 e 7, e perde sua atividade em <10 minutos a 68 °C. Ela perde sua atividade a uma taxa de 6%/hora em tampão de acetato (pH 5,0) e em tampão tris (pH 7,2) com concentração de 1 mg/ml.

Nota de análise

Proteína determinada por biureto.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)