C5138

Colagenase

suitable for release of physiologically active rat hepatocytes, Type IV, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Sinônimo(s): Clostridiopeptidase A
• Número CAS: 9001-12-1
• Número da licença da enzima: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-582-9
• Número MDL: MFCD00130830
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: Clostridium histolyticum
• Nível de qualidade: 200
• Formulário: powder
• atividade específica: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• peso molecular: 68-130 kDa
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• solubilidade: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• adequação: suitable for release of physiologically active rat hepatocytes
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• Condições de expedição: wet ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A colagenase de Clostridium histolyticum foi usada:

• no preparo de solução de colagenase para digestão de tecidos tumorais
• como um suplemento em solução salina tamponada com fosfato para digestão de tecido adiposo mesentérico extirpado
• como um suplemento no meio 1640 do Roswell Park Memorial Institute (RPMI-1640) para digestão de segmentos de cólon
• para digestão de tecido endometrial
• no preparo de enzima A e enzima B para digestão de testículos descapsulados

A colagenase foi usada no preparo de tecido arterial para o estudo de produtos finais da glicosilação avançada (AGE). A enzima também foi usada juntamente com outras proteases para a desagregação de tumores humanos, rins de camundongo, cérebros humanos, epitélio pulmonar e diversos outros tecidos. Ela também é eficaz em estudos de perfusão renal e hepática, digestão de pâncreas e isolamento de hepatócitos não parenquimais. Essa enzima é testada quanto à adequação para a liberação de hepatócitos, a aproximadamente 1 mg/ml de concentração, em um volume total de 100 ml para cada fígado de rato.

Adequada para uso na preparação de suspensão de célula única para sequenciamento.

Ações bioquímicas/fisiológicas

O Clostridium histolyticum produz duas classes de colagenases. As colagenases de clostrídio são mais eficazes que as colagenases de mamíferos. Elas clivam em diversos sítios de clivagem dentro da tripla-hélice do colágeno. As colagenases de clostrídio estão envolvidas na invasão bacteriana na gangrena gasosa.

A colagenase é ativada por quatro gramas de átomos de cálcio por mol de enzima. Ela é inibida por ácido etileno glicol-bis(beta-aminoetil éter)-N, N, N′,N′-tetracético, beta-mercaptoetanol, glutationa, ácido tioglicólico e 8-hidroxiquinolina.

A liberação eficaz de células do tecido requer a ação de enzimas colagenase e da protease neutra. A colagenase é ativada por quatro átomos-grama de cálcio (Ca²⁺) por mol de enzima. Acredita-se que o filtrado da cultura contenha pelo menos 7 proteases diferentes, que variam em peso molecular de 68-130 kDa. O pH ideal é 6,3-8,8. A enzima é usada tipicamente para digerir os componentes conjuntivos em amostras de tecido para liberar células individuais. O tratamento com colagenase pode provocar a morte de algumas células. Tipicamente, concentrações na faixa de 0,1 a 5 mg/ml são usadas para digestão. A duração da reação varia de 15 minutos a várias horas e produz dissociação celular satisfatória sem causar morte celular excessiva. O tampão de Krebs-Ringer com cálcio e BSA é preferível e Zn²⁺ é necessário para atividade.

Atenção

Tal como fornecido, este produto é estável por 6 anos a -20 °C. Não há perda na atividade de FALGPA ou proteases em 30 dias a 37 °C, 50 °C e -20 °C. As soluções de colagenase bruta são estáveis se forem congeladas rapidamente em alíquotas (na concentração de 10 mg/ml) e mantidas congeladas a -20 °C. Ciclos adicionais de congelamento/descongelamento danificam a solução. O produto retém 100% de atividade ao longo de 7 horas se mantido em gelo.

Definição da unidade

Uma unidade de digestão de colágeno (CDU) libera peptídeos de colágeno do tendão de Aquiles bovino que equivalem em cor de ninidrina a 1,0 μmol de leucina em 5 horas em pH 7,4 a 37 °C na presença de íons de cálcio. Uma unidade de hidrólise de FALGPA hidrolisa 1,0 μmol de furilacriloil-Leu-Gli-Pro-Ala por min a 25 °C. Uma unidade de protease neutra hidrolisa caseína para produzir cor equivalente a 1,0 μmol de tirosina por 5 h em pH 7,5 a 37 °C. Uma unidade de clostripaína hidrolisa 1,0 μmol de BAEE por min em pH 7,6 a 25 °C na presença de DTT.

Nota de preparo

As soluções são preparadas tipicamente em concentração de 1-2 mg/ml em tampão TESCA (contendo 50 mM de TES, 0,36 mM de cloreto de cálcio, pH 7,4, a 37 °C).
Este produto também contém atividade de clostripain, protease neutra e tríptica.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08,GHS07
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H315,H319,H334,H335
• Declarações de precaução: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classificações de perigo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Órgãos-alvo: Respiratory system
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves