D4513

Desoxirribonuclease I

Type II-S, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein

• Sinônimo(s): DNase I, Desoxirribounucleato 5′-oligonucleotídeo-hidrolase
• Número CAS: 9003-98-9
• Número da licença da enzima: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-667-0
• Número MDL: MFCD00130918
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.54

Propriedades

• fonte biológica: bovine pancreas
• esterilidade: sterile-filtered
• tipo: Type II-S
• forma: lyophilized powder
• atividade específica: ≥2,000 units/mg protein
• peso molecular: ~31 kDa
• purificado por: chromatography
• composição: Protein, ≥80%
• embalagem: vial of ≥10.0 mg protein
• técnica(s): DNA purification: suitable
• Impurezas: endotoxin, tested
• solubilidade: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear(lit.)
• adequação: suitable for molecular biology
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• atividade externa: Chymotrypsin ≤0.01%; Protease ≤0.005%; RNase ≤0.01%
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Aplicação

A DNAse I da Sigma foi comparada ao inibidor de interleucina 1 derivada de urina humana por sua capacidade de hidrolisar [¹⁴C]DNA [¹⁴C]DNA. Também foi usada para clivar um fragmento de restrição Hind III/Nci I de 139 pares de base para investigar a estabilidade da enzima para uso em experimentos de “footprinting”. A DNase I é amplamente usada como agente de “footprinting” para estudar a ligação medicamentos e proteínas ao DNA.

A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino foi usada em um estudo que investigou uma nova abordagem para obter RNase, DNase, colesterol esterase e tripsina de alta atividade derivadas de pâncreas bovino. A desoxirribonuclease I de pâncreas bovino também foi usada em um estudo para investigar o isolamento e posterior caracterização de DNase de fígado de carpa.

Usado para remoção de DNA de amostras proteicas.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A DNase I é uma endonuclease que age nas ligações fosfodiéster adjacente às pirimidinas para produzir polinucleotídeos com fosfatos nas terminações 5′ Na presença de Mg²⁺, a DNase I cliva cada fita de DNA de forma independente, e os sítios de clivagem são aleatórios. As duas fitas de DNA são clivadas aproximadamente no mesmo sítio na presença de Mn²⁺. O pH ideal é entre 7 e 8. Cátions bivalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ e Zn²⁺ são ativadores da enzima. Uma concentração de Ca²⁺ 5 mM estabiliza a enzima contra digestão proteolítica. A DNase I do pâncreas bovino consiste em quatro componentes diferenciáveis por meio de cromatografia, A, B, C e D, com razões molares de 4:1:1, respectivamente. São encontradas apenas pequenas quantidades de D. 2-Mercaptoetanol, quelantes, dodecil sulfato de sódio (SDS) e actina são inibidores conhecidos da atividade enzimática.

Definição da unidade

Uma unidade Kunitz produz um ΔA₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml em pH 5,0 a 25 °C, usando DNA, tipo 1 ou III, como substrato. (1 unidade = 1 unidade Kunitz)

forma física

Pó liofilizado contendo cloreto de cálcio

Nota de preparo

O pó de enzima pode ser reconstituído em água ou qualquer tampão em pH 4,0-9,0, exceto tampão fosfato. Quelantes de cálcio devem ser evitados. A solução de 10 mg/ml de DNase I em NaCl 0,15 M pode perder <10% de sua atividade quando armazenada em alíquotas por uma semana a −20 °C. As mesmas soluções armazenadas em alíquotas a 2-8 °C podem perder cerca de 20% de atividade. Ela continua ativa por até cinco horas a 60 °C entre pH 5 e 7, e perde a atividade em <10 minutos a 68 °C. Ela perde a atividade a uma taxa de 6%/hora em tampão acetato (pH 5,0) e tampão tris (pH 7,2) em uma concentração de 1 mg/ml.

Nota de análise

Proteínas determinadas por biureto.

Outras notas

Vencedor do Prêmio CiteAb 2024 para Fornecedor de Sucesso em Pesquisa sobre Parkinson′

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H334
• Declarações de precaução: P261 - P284 - P501
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)