FPCRN-RO

Taq DNA polimerase FastStart^™, dNTPack

• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.21

Propriedades

• grau: Molecular Biology
• Nível de qualidade: 100
• forma: liquid
• uso: sufficient for ≤1,250 reactions (04738403001); sufficient for ≤2,500 reactions (04738420001); sufficient for ≤250 reactions (04738357001); sufficient for ≤50 reactions (04738314001); sufficient for ≤500 reactions (04738381001)
• atividade específica: 5 U/μL
• embalagem: pkg of 1,000 U (04738381001 [4x250 U]); pkg of 2,500 U (04738403001 [10x250 U]); pkg of 5,000 U (04738420001 [20x250 U]); pkg of 100 U (04738314001); pkg of 500 U (04738357001 [2x250 U])
• fabricante/nome comercial: Roche
• concentração: 40 U/mL; 55 U/mL
• Parâmetros: 72 °C optimum reaction temp.
• técnica(s): DNA amplification: suitable; PCR: suitable
• cor: colorless
• pH: 8.0-9.0
• solubilidade: water: miscible
• adequação: suitable for molecular biology
• aplicação(ões): life science and biopharma
• atividade externa: nicking activity, none detected (up to 10U w.pBR 322-DNA); ribonuclease, none detected; unspecified endonuclease, none detected
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A dNTPack enzimática consiste em Taq DNA polimerase FastStart e uma solução pronta para o uso de nucleotídeos de grau para PCR. A Taq DNA polimerase FastStart é uma enzima versátil que pode ser usada em uma ampla variedade de aplicações e em diversas plataformas de instrumentos. Esta Taq DNA polimerase recombinante modificada e termoestável é inativa em temperaturas abaixo de +75 °C, mas é ativada por uma etapa de termoativação de 2 a 4 minutos a +95 °C. Tendo em vista que a Taq DNA polimerase é inativa em temperaturas baixas, a Taq DNA polimerase FastStart não consegue alongar os híbridos de moldes de primer não específicos que podem se formar nessas temperaturas. São fornecidos também um sistema de tamponamento para PCR otimizado e uma solução rica em GC para possibilitar que a enzima processe uma ampla gama de moldes.

Aplicação

A Taq DNA polimerase FastStart^™ é uma forma quimicamente modificada e termoestável de Taq DNA polimerase recombinante. A enzima é inativa a +15 ºC a +25 °C durante o preparo da PCR e é ativada a +95 °C durante a desnaturação inicial. Esta enzima propicia resultados melhores devido ao desenho único da enzima e ao sistema de tamponamento otimizado. A Taq DNA polimerase FastStart é uma ferramenta ideal para PCR do tipo “hot start”, porque a enzima continua inativa durante o preparo da PCR e antes da etapa inicial de desnaturação. Ela pode ser aplicada em PCR:

• PCR hot start até 3 kb
• RT-PCR hot start até 3 kb
• PCR multiplex
• Moldes complicados, p.ex., estruturas secundárias ou sequências ricas em GC
• PCR automatizada, p.ex.,, manuseio em temperatura ambiente
• PCR quantitativa (qPCR)

Para maior praticidade, selecione o concentrado 2x pronto para uso FastStart PCR Master.

Características e benefícios

Atividade por volume: 5 U/μl
Cada dNTPack contém uma mistura 10 mM de nucleotídeos e sais de sódio sem aditivos pronta para uso.

• Maior especificidade, sensibilidade e rendimento:

A PCR “hot start” facilita o preparo de PCR.

• Use preparo robótico.

Use esta mistura enzimática estável por 24 horas em +15 ºC a +25 °C.

• Evite a transferência de contaminação em PCR.

Incorpore dUTP e use uracil DNA glicosilase para pré-tratar misturas-mestre de PCR.

• Econômico.

Use a solução pré-misturada prática de nucleotídeos de grau para PCR.

Embalagem

1 kit contendo 6 componentes

Qualidade

Cada lote é testado quanto à sua função usando DNA genômico humano e primers específicos para o fragmento de 365 pb do gene tPA humano, bem como um fragmento de 284 pb do gene Apo E com teor de GC de 74%. Cada lote também é testado quanto à ausência de exonucleases e endonucleases e atividade de corte (“nicking”).
Para obter detalhes consulte a respectiva Instrução de uso.

Definição da unidade

Uma unidade de DNA polimerase FastStart é definida como a quantidade de enzima que incorpora 10 nmol de desoxirribonucleosídeos trifsfato totais em DNA precipitável em ácido em 30 minutos a +75 °C nas condições de ensaio definidas no ensaio unitário.

Teor de unidades: 1 μg de DNA M13mp9ss , 0,3 μg de primer de sequenciamento M13 e 0,1 μCi de [α--^32P] dCTP são incubados com diferentes quantidades de unidades de Taq DNA polimerase FastStart em 50 μl de tampão de incubação a 65 °C por 60 min. A quantidade de dNTPs incorporados é determinada.

Atividade por volume: 5 U/μl

Armazenamento e estabilidade

Mantenha o recipiente hermeticamente fechado, em local seco e bem ventilado.

Outras notas

Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Os protocolos “hot start” melhoram a especificidade, a sensibilidade e o rendimento da PCR. Grupos de bloqueio termolábeis inativam a enzima modificada a +15 a +25 °C. Não há alongamento quando os primers se ligam de forma inespecífica. A enzima é ativada pela remoção dos grupos de bloqueio a +95 °C por 2 a 6 minutos. São produzidos produtos de PCR com extremidades salientes (“overhangs”) 3′ A únicas, ideais para clonagem T-A. Para prevenir a transferência na PCR, use a PCR Nucleotide Mix^PLUS e uracil DNA glicosilase termolábil.

Informações legais

AVISO AO COMPRADOR: LICENÇA LIMITADA<br />O uso deste produto está coberto pela patente N.º 6.127.155 dos EUA e pelos pedidos de patente correspondentes fora dos EUA.  A compra deste produto inclui imunidade limitada e não transferível contra ações legais nos termos dos pedidos de patente supracitados para utilização apenas desta quantidade de produto para pesquisas internas do próprio comprador.  Nenhum direito nos termos de nenhum outro pedido de patente e nenhum direito a realizar serviços comerciais de nenhum tipo, incluindo sem limitações a apresentação dos resultados das atividades do comprador em troca de remuneração ou outra contraprestação comercial, é expresso explicitamente, por implicação ou preclusão.  Este produto destina-se apenas ao uso em pesquisa. Usos em diagnósticos humanos e veterinários nos termos dos pedidos de patente da Roche exigem uma licença separada da Roche.  Todos os usos, exceto para pesquisa interna e uso diagnóstico humano e veterinário, nos termos dos pedidos de patente da Roche, exigem uma licença separada da Thermo Fisher Scientific. Mais informações sobre a compra de licenças da Roche podem ser obtidas junto ao Licensing Department (Departamento de licenças) da Roche Molecular Systems, Inc., 4300 Hacienda Drive, Pleasanton, Califórnia 94588, EUA ou Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, 68305 Mannheim, Alemanha.  Mais informações sobre a compra de licenças da Thermo Fisher Scientific podem ser obtidas junto ao Licensing Department (Departamento de licenças) da  Thermo Fisher Scientific, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, Califórnia 92008, EUA.</ br>AVISO AO COMPRADOR: LICENÇA LIMITADA<br />O uso deste produto está coberto pelas patentes N.º 5.677.152 e 5.773.258 dos EUA e pedidos de patente correspondentes fora dos EUA.  A compra deste produto inclui imunidade limitada e não transferível contra ações legais nos termos dos pedidos de patente supracitados para utilização apenas desta quantidade de produto para pesquisas internas do próprio comprador.  Nenhum direito nos termos de nenhum outro pedido de patente e nenhum direito a realizar serviços comerciais de nenhum tipo, incluindo sem limitações a apresentação dos resultados das atividades do comprador em troca de remuneração ou outra contraprestação comercial, é expresso explicitamente, por implicação ou preclusão.  Este produto destina-se apenas ao uso em pesquisa.  Usos em diagnósticos humanos e veterinários nos termos dos pedidos de patente da Roche exigem uma licença separada da Roche.  Todos os usos, exceto para pesquisa interna e uso diagnóstico humano e veterinário, nos termos dos pedidos de patente da Roche, exigem uma licença separada da Thermo Fisher Scientific. Mais informações sobre a compra de licenças da Roche podem ser obtidas junto ao Licensing Department (Departamento de licenças) da Roche Molecular Systems, Inc., 4300 Hacienda Drive, Pleasanton, Califórnia 94588, EUA ou Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, 68305 Mannheim, Alemanha.  Mais informações sobre a compra de licenças da Thermo Fisher Scientific podem ser obtidas junto ao Departamento de licenças (Licensing Department) da  Thermo Fisher Scientific, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, Califórnia 92008, EUA.

FastStart is a trademark of Roche

Somente componentes do kit

• FastStart Taq DNA Polymerase, in storage and dilution buffer 5 U/μl
• PCR Reaction Buffer, with 20 mM MgCl₂ 10x concentrated
• PCR Reaction Buffer, without MgCl₂ 10x concentrated
• MgCl₂ Stock Solution 25 mM
• GC-RICH Solution 5x concentrated
• PCR Nucleotide Mix

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): does not flash
• Ponto de fulgor (°C): does not flash