Nukleazy (DNazy i RNazy)

Endonukleazy restrykcyjne

Nukleazy do trawienia DNA i RNA 

Nasze nukleazy różnią się specyficznością rozszczepiania, a także właściwościami, takimi jak optymalne pH, umożliwiając badaczowi wybór enzymu trawiącego najlepiej dostosowanego do potrzeb eksperymentalnych.Deoksyrybonukleaza I ze źródeł ssaków, na przykład, daje produkty z terminalem 5' P1 z Penicillium citrinum - degraduje jednoniciowe DNA i RNA, ale nie dwuniciowe DNA. Rybonukleaza A hydrolizuje RNA zanieczyszczające próbki białek lub preparaty plazmidowego DNA. Wiele z tych enzymów ma dodatkowe zastosowania w biologii molekularnej. Na przykład DNaza I "nacina" DNA, aby umożliwić włączenie znakowanych zasad. RNaza A jest narzędziem w teście ochrony przed RNazą, który mierzy obfitość określonych mRNA.

Deoksyrybonukleaza I i deoksyrybonukleaza II DNase Enzymes

Deoksyrybonukleaza I katalizuje endonukleolityczne rozszczepienie podwójnej i pojedynczej nici DNA w celu uzyskania produktów końcowych 5'-fosfodinukleotydu i 5'-fosfooligonukleotydu. Produktem hydrolizy jest złożona mieszanina 5'-fosforanowych mononukleotydów i oligonukleotydów. W obecności jonów magnezu DNaza I atakuje każdą nić DNA niezależnie, a miejsca cięcia są losowe. W obecności manganu (II) DNaza I rozszczepia obie nici DNA w przybliżeniu w tym samym miejscu. Większość protokołów wykorzystuje jon magnezu z DNazą I, ale do określonych celów stosuje się mangan. Ponadto, deoksyrybonukleaza II katalizuje endonukleolityczne rozszczepienie podwójnej i pojedynczej nici DNA, dając 3'-fosforany nukleozydów i 3'-fosfooligonukleotydowe produkty końcowe. Zakres pH dla aktywności wynosi od 4,0 do 6,5, przy czym tylko około 15% przy pH 6,5. z optymalnym pH 5,0. Optymalna stabilność enzymu występuje przy pH 5 - 5,5, z szybką inaktywacją przy pH 8,5 w temperaturze 30 °C. Oferujemy szeroką gamę enzymów DNazy do różnych typów próbek i zastosowań. Niezależnie od tego, czy są one liofilizowane, czy w postaci płynnej, niektóre z naszych DNaz zawierają znacznie niskie stężenia RNazy lub proteaz, aby chronić próbkę przed niepożądanym trawieniem.

Rybonukleaza A, rybonukleaza H i rybonukleaza T₁ RN.enzymy

Rybonukleaza A katalizuje endonukleolityczne rozszczepienie RNA w celu uzyskania 3'-fosforanów nukleozydów i 3'-fosfooligonukleotydów kończących się na Cp lub Up. Aktywatory RNazy A obejmują sole potasowe i sodowe. Optymalna temperatura dla aktywności wynosi 60 °C, chociaż enzym wykazuje aktywność w zakresie 15-70 °C. Optymalne pH wynosi 7,6, z zakresem aktywności 6-10. Najwyższą aktywność wykazuje z jednoniciowym RNA. RNaza A jest bardzo stabilnym enzymem i może wytrzymać temperatury do 100 °C. W temperaturze 100 °C RNaza A jest najbardziej stabilna w zakresie pH od 2,0 do 4,5. Rybonukleaza H specyficznie hydrolizuje wiązania fosfodiestrowe RNA w dupleksach RNA:DNA, generując produkty z końcami 3'-hydroksylowymi i 5'-fosforanowymi. Degraduje tylko składnik RNA hybrydy DNA-RNA (RNA, który jest związany wodorem z komplementarną nicią DNA).

Dodatkowo, rybonukleaza T₁ katalizuje dwuetapowe endonukleolityczne rozszczepienie RNA w celu uzyskania 3'-fosforanów nukleozydów i 3'-fosfooligonukleotydów kończących się głównie na Gp. W reakcji rozszczepienie zachodzi pomiędzy grupą 3'-fosforanową rybonukleotydu guanidynowego i 5'-hydroksylową sąsiedniego nukleotydu. Produktem wyjściowym jest cykliczny nukleozyd fosforanowy 2':3', który jest hydrolizowany do odpowiedniego 3'-fosforanu nukleozydu. W roztworze jest odporny na ciepło (100 °C przez 10 minut przy pH 6) i kwas, ale niestabilny w roztworze alkalicznym (pH 9). Należy zauważyć, że reakcja katalizowana przez enzym nie może być zatrzymana przez podgrzanie mieszaniny reakcyjnej do 100 °C. Oferujemy szeroką gamę enzymów RNazy, aby wspierać różne rodzaje próbek i zastosowań. Niezależnie od tego, czy są one liofilizowane, czy w postaci płynnej, niektóre z naszych RNaz zawierają znacznie niskie stężenia proteaz, aby chronić próbkę przed niepożądanym rozszczepieniem białka.