Klonowanie molekularne i ekspresja białek
Celem klonowania molekularnego jest wstawienie genu zainteresowania (GOI) do wektora plazmidowego, kolistego fragmentu DNA, który zawiera różne elementy ułatwiające klonowanie, selekcję klonów i ekspresję białek. Badacze często używają enzymów restrykcyjnych DNA i ligazy do wstawienia GOI w ramce w wektorze ekspresyjnym w celu późniejszej ekspresji białka. Wektor ten jest następnie wstawiany do komórki, która będzie wyrażać białko kodowane przez GOI lub ekspresja białka jest osiągana przy użyciu bezkomórkowych systemów syntezy białek.
Po wyrażeniu białka można zbadać jego funkcję, ponieważ wpływa ono na sygnalizację komórkową, morfologię lub inne aspekty w komórce. Alternatywnie, białko może być wyrażane w dużych ilościach, oczyszczane i wykorzystywane w wielu dalszych zastosowaniach. Aby uzyskać dodatkowe informacje, zapoznaj się z naszą kompleksową ofertą niezawodnych odczynników i zasobów, które są dostępne w całym procesie klonowania i ekspresji dla systemów ekspresji białek owadów, bakterii i ssaków.
Czytaj więcej o
- Enzymy restrykcyjne i enzymy modyfikujące DNA
- Bezkomórkowe systemy ekspresji i wektory ekspresji wykorzystujące promotory CMV i technologię znaczników FLAG®
- Novagen® pET System, SnapFast™ Vectors, Simplicon™ Vectors i UCOE™ Systemy ekspresji białek
- Odczynniki i zasoby do transformacji bakterii i drożdży
Powiązane zasoby dotyczące produktów
- Article: Cell-Free Protein Synthesis or Expression
Bezkomórkowa synteza białek szybko wytwarza rekombinowane białka bez udziału komórek, wykorzystując do tego celu maszyny translacyjne z różnych typów komórek.
- Article: Competent Cell Selection & E. coli Markers Guide
Select competent cells by application, transformation efficiency, and genotype. We also present a list of E. coli markers for reference.
- Article: Simplicon™ in vivo Protein Expression System
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
- Brochure: Genomics
Streamline your molecular biology workflow.
Enzymy restrykcyjne i modyfikujące DNA
W klonowaniu molekularnym badacze często używają dwóch ogólnych typów enzymów - enzymów restrykcyjnych do cięcia DNA i enzymów modyfikujących do wprowadzania modyfikacji kwasu nukleinowego, często przed etapem ligacji. Zapoznaj się z naszą szeroką gamą enzymów restrykcyjnych i innych enzymów modyfikujących, takich jak fosfataza alkaliczna, proteaza, polimeraza T7 RNA, rybonukleaza A i ligaza T4 DNA dla wszystkich potrzeb badawczych.
Bezkomórkowe systemy ekspresji i wektory ekspresji wykorzystujące promotory CMV i technologię znaczników FLAG®
.Nasze portfolio klonowania i ekspresji sprawia, że inżynieria genetyczna jest tańsza i bardziej wydajna, zapewniając kolekcję wszechstronnych wektorów z usprawnionymi protokołami i zestawami do klonowania. Wybierz z naszej szerokiej gamy systemów klonowania i ekspresji, w tym naszego system bezkomórkowej syntezy lub ekspresji białek, taki jak zestaw do bezkomórkowej ekspresji białek nowej generacji (kiełki pszenicy) (nr produktu CFPS700) i zestaw ALiCE® (nr kat. AL0103000). Dodatkowo, odkryj bakteryjne i ssacze wektory ekspresyjne FLAG® do ekspresji peryplazmatycznej lub cytoplazmatycznej w przejściowych lub stabilnych systemach transfekcji i pewnie wyrażaj swój FLAG® lub 3X FLAG® na N- lub C-końcu z miejscem rozszczepienia enterokinazy (Ek) w celu usunięcia znacznika fuzyjnego, jeśli to konieczne.
Novagen® pET System, Snap Fast™ Vectors, Simplicon™ Vectors, and UCOE™ Protein Expression Systems
Wszystkie wektory ekspresyjne E. coli i wektory ekspresji owadów wykazują oporność na ampicylinę, co ułatwia selekcję pozytywnych transformantów. Odkryj Novagen® pET System, złoty standard klonowania i ekspresji rekombinowanych białek w ekspresji bakteryjnej. Zaprojektowana przez Oxford Genetics rodzina wektorów SnapFast™ oferuje szybki i łatwy protokół umożliwiający przeniesienie GOI z jednego wektora do drugiego przy użyciu miejsc cięcia SnapFast™, generując wektory, które są kompatybilne z systemami ekspresji owadów, drożdży, bakterii i ssaków. Dzięki naszej technologii wektorów ekspresyjnych Ubiquitous Chromatin Opening Element (UCOE™) można uzyskać gramy białka w mniej niż 30 dni w stabilnie transfekowanych komórkach ssaków. Technologia ekspresji UCOE™ zapobiega wyciszaniu transgenu i zapewnia spójną, stabilną i wysoką ekspresję genów, nawet 20-krotnie wyższą niż w przypadku konwencjonalnych wektorów, niezależnie od miejsca integracji chromosomalnej. Simplicon™ In Vivo Protein Expression System to nieintegrujący genomu, przestrajalny i syntetyczny, samoreplikujący się system ekspresji oparty na RNA, który generuje natychmiastową, wysoce zrównoważoną ekspresję białek wielu genów w transfekowanych komórkach ludzkich bez ryzyka integracji genomu. Aby uzyskać dodatkowe informacje, zobacz nasze technologię Simplicon™ wykorzystywaną do wydajnego generowania ludzkich iPSCs.
Odczynniki i zasoby do transformacji bakterii i drożdży
Transformacja bakterii to proces wprowadzania obcego DNA do bakterii przy użyciu metod takich jak szok termiczny i elektroporacja. Nasze portfolio kompetentnych komórek zostało zaprojektowane z myślą o optymalnej ekspresji białek nawet dla najbardziej wymagających białek rekombinowanych. Przejrzyj naszą Przewodnik wyboru komórek kompetentnych, aby wybrać spośród wielu nowych bakteryjnych komórek kompetentnych do szerokiej gamy zastosowań, w tym ekspresji białek, rutynowego lub trudnego klonowania i generowania bibliotek. Dodatkowo, ekspresja białek rekombinowanych w Saccharomyces cerevisiae ma wiele zalet, takich jak proste protokoły, stosowanie podstawowych odczynników i skalowalność. Zapoznaj się z wieloma dostępnymi produktami do transformacji drożdży w ramach procesu ekspresji białek. Nasze kompetentne komórki NovaBlue®, zoptymalizowane pod kątem wydajności transfekcji i zachowania plazmidów, wspierają doskonałe przygotowanie bibliotek i stabilność plazmidów. Dodatkowo, komórki kompetentne Novagen® zostały zaprojektowane w celu ułatwienia prawidłowego fałdowania białek, zwiększenia rozpuszczalności lub ekspresji białek cytotoksycznych. Najpopularniejszymi markami są systemy Rosetta™, Origami™ i Overnight Express™.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?