ECAS9GFPPR

eSpCas9-GFPタンパク質

from Streptococcus pyogenes with mutations conferring enhanced specificity, fused with enhanced GFP, recombinant, expressed in E. coli, 3X NLS

• 別名: eSpCas9-EGFP, eSpCas9-GFP
• UNSPSCコード: 12352202
• NACRES: NA.51

特性

• リコンビナント: expressed in E. coli
• アッセイ: ≥90% (SDS-PAGE)
• フォーム: lyophilized powder
• 包装: pkg of 1 kit (3 components)
• レポーター遺伝子: GFP
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

特異性が向上したStreptococcus pyogenes由来の遺伝子組換えCas9-GFPタンパク質（約192 KD）は、ゲノム編集実験にすぐに使用できる試薬です。標的特異的なガイドRNAと併用すると、eSpCas9-GFPタンパク質は、培養細胞のトランスフェクションや、一細胞胚注入を介する遺伝子改変動物の迅速作成に適した、標的ヌクレアーゼとして働きます。

励起ピークが488 nm、発光ピークが509 nmのN末端に融合した増強型緑色蛍光タンパク質により、フローサイトメトリーアプリケーションの実用性に加えて、トランスフェクトされたRNP複合体を可視化できます。  本タンパク質は、最適な活性のために配置された3つの異なる核局在配列も含みます。

アプリケーション

• 機能ゲノミクス
• ターゲットバリデーション
• ゲノム編集
• 蛍光顕微鏡検査
• フローサイトメトリー

特徴および利点

• 野生型Cas9よりも強化された特異性
• 高活性
• 注入／トランスフェクトにすぐ使用できます

包装

50 μg（≥260 pmol）入り
250 μg（≥1300 pmol）入り

構成

各キットは以下で構成されています：

• 凍結乾燥したeSpCas9-GFP遺伝子組換えタンパク質の1バイアル
• 1 mLの1倍希釈バッファー1バイアル
• 1 mLのグリセロール含有ヌクレアーゼフリー水1バイアル

原理

CRISPR/Cas系は、細菌および古細菌において、侵入するウイルスやプラスミドに対する防御として働いています。近年、単一Cas9タンパク質とノンコーディングのガイドRNA（gRNA）という2つの分子成分を用いて、真核細胞系で機能する、細菌Streptococcus pyogenes由来のII型CRISPR/Cas系が作られています。Cas9エンドヌクレアーゼを単一gRNAによりプログラムして、希望するゲノム位置でDNA二本鎖切断（DSB）を発生させることができます。ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は続いて、非相同末端結合（NHEJ）または相同組換え修復（HDR）のいずれかの内因性DNA修復過程を活性化し、標的DSBを修復します。

新たに遺伝子操作されたeSpCas9 (1.1)は確立されたCRISPRシステムの効率的なターゲット遺伝子の編集を可能にし、オフターゲット効果減少のベネフィットが得られます。Slaymakerらが述べたとおり、SpCas9の染色体結合モチーフでの点変異（K848A/K1003A/R1060A）はオンターゲットのフィデリティを向上させ、切断効率を低下させません。

再構成

特異性が向上した凍結乾燥S. pyogenes eSpCas9-GFPタンパク質は、希望する濃度になるまで溶解液に再懸濁してください。チューブを穏やかに叩いて凍結乾燥粉末を完全に溶解させ、氷上で10分間インキュベートし、チューブを遠心して材料をチューブの底に移動させます。

その他情報

gRNAの注文には、弊社のCRISPR選択ツールをご使用ください

弊社の他のMISSION^® Cas9 Proteins（ミッションCas9タンパク質）については、SigmaAldrich.com/CRISPRproteinsでご確認ください。

法的情報

CRISPR使用許諾契約

MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

安全性情報

• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids