RPOLT3-RO

T3 RNAポリメラーゼ

from Escherichia coli HB101

• 別名: mRNA, ポリメラーゼ
• Enzyme Commission number: 2.7.7.6 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSCコード: 12352204

特性

• 由来生物: Escherichia coli (HB101)
• 品質水準: 100
• アッセイ: 100% (SDS-PAGE)
• 形状: solution
• 比活性: ≥20 U/μL
• 分子量: 100 kDa (single polypeptide chain)
• 包装: pkg of 1,000 U (11031163001); pkg of 5,000 U (11031171001)
• メーカー／製品名: Roche
• 濃度: <0.1 % (w/w)
• テクニック: DNA sequencing: suitable; Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• 色: colorless
• pH: 7.9 (39 °F); 8.0 (68 °F)
• 溶解性: water: miscible
• 適合性: suitable for molecular biology
• NCBIアクセッション番号: NP_418414
• UniProtアクセッション番号: P0A8V2
• アプリケーション: genomic analysis; life science and biopharma
• その他の活性: Nicking activity 150 units, none detected; RNases 150 units; endonucleases 150 units, none detected
• 保管温度: −20°C
• 遺伝子情報: Escherichia coli ... rpoB(948488)

詳細

詳細

この酵素により、均一に識別化された単鎖RNAを生成することができます。転写物は、ビオチンまたはDIG-11-UTPにより非放射性的に標識化するか、あるいは[α-³²P]または[α-³⁵S]で標識化されたヌクレオチドにより、高度特定活性まで標識化することができます。T3 RNAポリメラーゼは、プロモーターに高度特定化されたDNA依存RNAポリメラーゼ です。T3プロモーターの下流のDNAのみが転写されます。

特異性

プロモーター特異性
T3 RNAポリメラーゼは、極度にプロモーター特異性があり、バクテリオファージT3 DNAまたはT3プロモーターの下流でクローンされたDNAのみを転写します。
熱による不活性化2μl 0.2 M EDTA (pH8.0)の添加および／または65°Cの加熱により、反応は停止します。

アプリケーション

T3 RNA ポリメラーゼは、T3プロモーターから下流のクローンされたDNAテンプレートからRNAを転写することができます。標識化NTPによる合成により、高度標識化RNAを生成することができます。合成されたRNAは、以下の多くのアプリケーションで使用することができます：

• RNAまたはDNAブロッティング技術
• In situハイブリダイゼーション
• RNase保護の研究：酵素によって合成された転写物は、RNAの切り貼りおよび処理の研究用の前駆物質RNAとして使用されます。
• 転写反応中に、過剰なm7GpppGまたはm7GpppAをGTPまたはATPに付加することによるin vitroなキャップ化RNAの合成。生成されたアンチセンスRNAを細胞に導入することで、対応する遺伝子の発現を抑制することができます。

包装

一つのキットは二つの部品を有します。

品質

最新の品質管理手順に基づいて試験されたエンドヌクレアーゼ、ニッキング活性、およびリボヌクレアーゼの不在。SP6/T7転写キットで試験済みの作用。

規格

体積活性：=20U/μl
ハイブリダイゼーションプローブの合成。T3 RNAポリメラーゼにより、均一に標識化されたRNAの高効率な生産が可能になります。この標識化されたRNAは、サザンブロット、ノーザンブロット、ドットブロット、ならびにin situハイブリダイゼーションで使用されます。
適切な標識：転写物は、ビオチン-16-UTP、DIG-11-UTP、またはフルオレセイン-12-UTPで非放射性的に標識化することができます。転写物は、[a-32P]または[a-35S]で標識化されたヌクレオチドにより、高度特定活性まで非放射性的に標識化することもできます。

注記：Roche社は、DIG-、ビオチン、およびフルオレセイン標識化用の特別仕様の10倍濃縮RNA標識化混合液を提供します。これらの混合液は、T3 RNAポリメラーゼによく作用します。

単位の定義

一ユニットは、1 nMol CMPを酸不溶性のRNA製品内で、+37°Cで60分以内に取り込む酵素活性度です。

体積活性：≥20 U/μl

調製ノート

活性化因子: BSA/スペルミン

保管および安定性

容器を密閉し、乾燥した換気の良い場所で保管してください。

その他情報

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

キットの構成要素のみ

• T3 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl
• Transcription Buffer 10x concentrated

安全性情報

• ピクトグラム: GHS07
• シグナルワード: Warning
• 危険有害性情報: H319
• 注意書き: P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2
• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash