Capto Core 700

Capto Core 700 jest przeznaczony do pośredniego oczyszczania i polerowania wirusów i innych dużych biomolekuł w trybie przepływowym.

Zaprojektowany do chromatografii przepływowej Koncepcja Capto Core opiera się na kulce z niefunkcjonalizowaną warstwą zewnętrzną (bez ligandu) i funkcjonalizowanym rdzeniem z dołączonym ligandem (rys. 3.14). Konstrukcja ta łączy w sobie właściwości GF i chromatografii adsorpcyjnej. Pory kulki w warstwie zewnętrznej, z przybliżonym limitem wykluczenia 700 kD, zostały specjalnie zaprojektowane, aby wykluczyć duże jednostki molekularne, takie jak wirusy, DNA, duże białka lub kompleksy białkowe z wejścia do przestrzeni wewnętrznej i interakcji z ligandem, umożliwiając w ten sposób wydajny etap oczyszczania przepływowego.

Rysunek 3.14. Schematyczny widok przekroju cząsteczki Capto Core 700 o średniej średnicy 85 μm. Małe zanieczyszczenia białkowe mogą dostać się do wnętrza cząsteczki matrycy i związać się z ligandem. Duże cząsteczki molekularne, takie jak cząsteczki wirusów, nie mogą dostać się do matrycy.

Rdzeń każdej kulki jest sfunkcjonalizowany oktyloaminą, która jest zarówno hydrofobowa, jak i dodatnio naładowana (przy pH < 10), co skutkuje wysoce wydajnym multimodalnym wiązaniem różnych zanieczyszczeń w szerokim zakresie pH i stężeń soli. Ta nowatorska technologia koralików rdzeniowych zapewnia Capto Core 700 podwójną funkcjonalność, łącząc separację wielkości i multimodalne wiązanie. Cechy te sprawiają, że Capto Core 700 jest doskonałą alternatywą dla mediów wykluczających, które są zwykle stosowane w końcowych etapach oczyszczania wirusów w produkcji szczepionek (patrz Heyward et al. [1977]; Nayak et al. [2005]; i Kalbfuss et al. [2008]). Capto Core 700 oferuje szereg korzyści w zakresie wydajności w porównaniu z GF, który jest często uważany za wąskie gardło wydajności w procesie polerowania ze względu na niskie prędkości przepływu i ograniczone obciążenie próbki. Charakterystyka Capto Core 700 została podsumowana w Załączniku 1 (Charakterystyka multimodalnych mediów chromatograficznych).

Kluczowe cechy wydajności Capto Core 700 obejmują:

• znacząco zwiększoną wydajność dzięki nawet 100-krotnie wyższemu obciążeniu próbki i znacznie wyższemu natężeniu przepływu w porównaniu z GF
• technologia koralików rdzeniowych z rdzeniem aktywowanym ligandem i nieaktywną otoczką umożliwiającą skuteczne wychwytywanie zanieczyszczeń, podczas gdy cząsteczki docelowe są gromadzone we frakcji przepływowej<
• prosta optymalizacja dzięki chromatografii przepływowej i solidna wydajność pozwalająca na szerokie okno działania Bardziej szczegółowy opis zastosowania Capto Core 700 znajduje się w rozdziale 4 (Oczyszczanie wirusa grypy A/H1N1 przy użyciu Capto Core 700).

Zwiększona wydajność

Technologia koralików rdzeniowych w Capto Core 700 umożliwia wysoką wydajność ładowania podczas grupowej separacji cząsteczek. Technologia kulek rdzeniowych pozwala również na krótkie czasy przebywania (czasami nawet 1 min), a w połączeniu z dużą 85 μm matrycą agarozową o wysokim przepływie, możliwe są prędkości przepływu nawet do 500 cm/h. Krótkie czasy przebywania, wysokie prędkości przepływu i wysokie obciążenie umożliwiają większe okno operacyjne niż tradycyjne GF. Większe okno operacyjne pozwala na zwiększenie przepustowości objętościowej i mniejszy sprzęt o mniejszej powierzchni. Duży rozmiar kulek przyczynia się również do zmniejszenia ciśnienia wstecznego podczas oczyszczania próbek o wysokiej lepkości. Ulepszone okno operacyjne zapewniane przez Capto Core 700 pozwala na większą swobodę projektowania procesów.

Rysunek 3.15 ilustruje schematycznie wyższą nośność i prędkości przepływu możliwe dzięki Capto Core 700 w stosunku do Sepharose 4 Fast Flow, który jest medium GF zwykle stosowanym w procesach polerowania na dużą skalę.

Rysunek 3.15 ilustruje schematycznie wyższą nośność i prędkości przepływu możliwe dzięki Capto Core 700 w stosunku do Sepharose 4 Fast Flow, który jest medium GF zwykle stosowanym w procesach polerowania na dużą skalę.

Rysunek 3.15. Schematyczna ilustracja znacznie większego obciążenia próbki i prędkości przepływu, które są możliwe dzięki Capto Core 700 w porównaniu z konwencjonalnymi nośnikami GF. Należy zauważyć, że schemat nie jest skalowany.

Regeneracja

Związane zanieczyszczenia są usuwane z kulek za pomocą procedur CIP (patrz Załącznik 2, Konserwacja nośników i warunki przechowywania, w celu konserwacji nośnika).