Białko G i białko A wiążą się z różnymi IgG

Wysokie powinowactwo białka G i białka A do regionu Fc poliklonalnych i monoklonalnych przeciwciał typu IgG stanowi podstawę do oczyszczania IgG, fragmentów IgG zawierających region Fc i podklas IgG.

Białko G i białko A są białkami bakteryjnymi pochodzącymi odpowiednio z grupy G Streptococci i Staphylococcus aureus. Po połączeniu z sefarozą, białko G i białko A tworzą niezwykle użyteczne, łatwe w użyciu nośniki chromatograficzne do rutynowego oczyszczania przeciwciał. Przykłady obejmują oczyszczanie przeciwciał monoklonalnych typu IgG, oczyszczanie poliklonalnych IgG i ich podklas, adsorpcję i oczyszczanie kompleksów immunologicznych z udziałem IgG oraz białek fuzyjnych. Podklasy IgG można izolować z supernatantów hodowli komórkowych, surowicy i wodobrzusza.

Tabela 1 przedstawia porównanie względnej siły wiązania białka G i białka A z różnymi immunoglobulinami. Informacje zostały zebrane z różnych publikacji. Siły wiązania są testowane z wolnym białkiem G lub białkiem A i mogą być stosowane jako wytyczne do przewidywania zachowania wiązania z białkiem G lub białkiem A w podłożu oczyszczającym. Jednak po połączeniu z matrycą powinowactwa interakcja może ulec zmianie. Na przykład, szczurza IgG1 wiąże się z białkiem G Sepharose, ale nie z białkiem A Sepharose.

Jednoetapowe oczyszczanie próbek ze źródeł natywnych lub pożywki uzupełnionej surowicą cielęcą w oparciu o specyficzność regionu Fc będzie współoczyszczać IgG gospodarza i może nawet wiązać śladowe ilości białek surowicy. Aby uniknąć śladowych ilości zanieczyszczających IgG, należy rozważyć alternatywne techniki, takie jak powinowactwo immunospecyficzne przy użyciu przeciwciał przeciwko IgG gospodarza sprzężonych, na przykład, z aktywowaną NHS sefarozą, chromatografią jonowymienną (IEX) z, na przykład, Capto™ adhere lub chromatografią oddziaływań hydrofobowych.

Tabela 1. Względna siła wiązania przeciwciał różnych gatunków z białkiem G i białkiem A mierzona w konkurencyjnym teście ELISA. Określono ilość IgG wymaganą do 50% zahamowania wiązania króliczej IgG skoniugowanej z fosfatazą alkaliczną.

Gatunek	Podklasa	Wiązanie białka G	Wiązanie białka A
Człowiek	IgA /th>
Człowiek	IgA IgD IgE IgG1 IgG2 IgG3< IgG4 IgM*	- - - ++++ ++++ ++++ ++++ -	zmienna - - ++++ ++++ - ++++ zmienna
Żółtko jaja ptasiego	IgY†	-	-
Krowa		++++	++
Pies		+	++
Koza		++	-
Świnka morska	IgG1	++	++++
Hamster		++	+
Koń		++++	++
Koala		+	-
Llama		+	-
Małpa (rhesus)		++++	++++
Mysz	IgG1 IgG2a IgG2 IgG3 IgM*	++++ ++++ +++ +++ -	+ ++++ +++ ++ zmienna
Świnia	.	++	+++
Królik		++	++++
Szczur	IgG1 IgG2a IgG2 IgG3	+ ++++ ++ ++	- - - +
Owca		++	+/-

* Oczyszczono przy użyciu kolumn HiTrap IgM Purification HP.
^† Oczyszczono przy użyciu kolumn HiTrap IgY Purification HP.
++++ = silne wiązanie.
++ = średnie wiązanie.
- = słabe wiązanie lub brak wiązania.