Usuwanie DNA/RNA w produkcji wirusów

Niezależnie od tego, czy opracowujesz terapie komórkowe i genowe, czy szczepionki wirusowe, usuwanie zanieczyszczających kwasów nukleinowych jest ważną częścią produkcji wirusów. Najprostszym sposobem na to jest użycie endonukleazy Benzonase®.

 

Zanieczyszczenia kwasami nukleinowymi podczas produkcji wirusów

Skąd pochodzą zanieczyszczenia kwasami nukleinowymi? Aby wyprodukować wirusy do szczepionek oraz terapii komórkowej i genowej, komórki są transformowane genetycznie. Po wyprodukowaniu wirusa komórki są poddawane lizie w celu uwolnienia cząstek wirusowych, DNA i RNA.

Te wolne kwasy nukleinowe stanowią zagrożenie dla bezpieczeństwa pacjentów i negatywnie wpływają na wydajność produktu. Światowa Organizacja Zdrowia i amerykańska Agencja Żywności i Leków (FDA) zalecają, aby dawka wynosiła 10 ng/dawkę, a wszelkie pozostałe kwasy nukleinowe miały długość 200 par zasad. Aby spełnić te wytyczne, proces oczyszczania musi znacznie zmniejszyć rozmiar i ilość kwasów nukleinowych.

Czym jest endonukleaza Benzonase^®?

Endonukleaza Benzonase jest endonukleazą, która normalnie ulega ekspresji w bakterii Serratia marcescens. Endonukleaza Benzonase^® ulega ekspresji w E. coli W3110, zmutowanym szczepie K12. Jest niespecyficzna i rozszczepia DNA i RNA na mniejsze fragmenty, działając zarówno na jednoniciowe, jak i dwuniciowe kwasy nukleinowe, a także liniowe i koliste formy kwasów nukleinowych. Nie ma aktywności proteolitycznej. Po rozbiciu kwasów nukleinowych, endonukleaza Benzonase^® i małe fragmenty DNA mogą być łatwo usunięte przez filtrację z przepływem stycznym.

Do czego służy Benzonase^®?

Benzonaza^® może być używana do wielu zastosowań w bioprzetwarzaniu, w tym:

• Oczyszczanie cząstek wirusowych (usuwanie DNA i RNA z białek i innych substancji biologicznych). Niezależnie od tego, czy chodzi o opracowanie szczepionek wirusowych, wektorów wirusowych do szczepionek, terapii komórkowej i genowej, czy wirusów onkolitycznych, endonukleaza Benzonase^® usuwa zanieczyszczenia kwasami nukleinowymi z produktu końcowego, aby spełnić normy regulacyjne.
• Zmniejszenie lepkości spowodowanej przez kwasy nukleinowe na etapach chromatografii. Usuwając kwasy nukleinowe z próbki, zmniejsza to zanieczyszczenie DNA, ponieważ DNA wiąże się z żywicami i zapewnia maksymalną zdolność wiązania wirusa podczas chromatografii, aby uzyskać najlepszą wydajność.
• Zapobieganie zlepianiu się komórek

Optymalizacja użycia Benzonase^®

Przed użyciem Benzonase^®./h2>

Przed użyciem Benzonazy^® w swoim procesie, należy zoptymalizować ilość potrzebnego enzymu. Jest to określane w pięcioetapowym procesie:

1. Określenie stężenia DNA
2. Obliczenie teoretycznego stężenia enzymu, którego potrzebujesz
3. Testowanie różnych stężeń enzymu wraz z różnymi czasami i temperaturami inkubacji
4. Sprawdź skalowanie
5. Sprawdź optymalne stężenie w różnych miejscach procesu

Optymalizacja wykorzystania enzymu jest najbardziej krytyczna w większych skalach, gdzie koszty materiałowe stają się znacznie ważniejsze, jak opisano w analizach modelowania kosztów. Aby dowiedzieć się więcej na temat optymalizacji endonukleazy Benzonase^® dla danego procesu, zapoznaj się z naszą notą aplikacyjną "Strategia optymalizacji i ekonomika procesu trawienia DNA w produkcji wektorów wirusowych do terapii genowej" oraz arkusz danych "Optymalizacja zastosowania endonukleazy Benzonase^® w oczyszczaniu wirusów."

Więcej informacji na temat stosowania Benzonase^® można znaleźć w naszym Benzonase^® Nuclease Q & A.

Opcje endonukleazy Benzonase^®

Dla biomanufaktury oferujemy trzy wersje naszej IPEG PQG GMP  endonukleazy Benzonase^®, aby spełnić wymagania prawne:

• Endonukleaza benzonazowa^®, stopień czystości I (≥99%) odpowiednia do produkcji biofarmaceutycznej EMPROVE^® Expert
• Endonukleaza benzonazowa^®. endonukleaza Safety Plus Emprove^® Expert
• Benzonase^® Salt Tolerant endonukleaza

Wszystkie wersje są przygotowywane w szczepie E. coli W3110 i stwarzają minimalne ryzyko zanieczyszczenia wirusami. Jednak zarówno endonukleaza Benzonase^® Safety Plus Emprove^® Expert, jak i endonukleaza Benzonase^® Salt Tolerant są wytwarzane z chemicznie zdefiniowanego podłoża i testowane pod kątem braku wirusów i mykoplazm. Aby dowiedzieć się więcej o przejściu ze standardowej endonukleazy Benzonase^® na endonukleazę Benzonase^® Safety Plus Emprove^® Expert, pobierz arkusz danych lub przeczytaj nasz biuletyn regulacyjny.

Benzonase^® endonukleaza intensyfikuje dalsze procesy poprzez zwiększenie wydajności tych etapów i skutkuje wyższym odzyskiem cząstek wirusowych. Pomaga również spełnić oczekiwania regulacyjne poprzez zmniejszenie ilości wolnych kwasów nukleinowych w produkcie końcowym.

Dowiedz się więcej, oglądając nasze webinarium na żądanie Zarządzanie ciągłością działania: Principles and Lessons Learned from the Benzonase^® Success Story lub pobierając naszą powiązaną White Paper.