Fluorescencyjne sondy retinoidowe
![Logo LightOx Logo LightOx](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/logos/logo-lightox/logo-lightox.png)
Fluorescencyjne analogi kwasu retinowego do stosowania w obrazowaniu komórkowym, testach wiązania białko-ligand i cytometrii przepływowej
Wprowadzenie do fluorescencyjnych sond retinoidowych
Fluorescencyjne sondy retinoidowe LightOx (Rysunek 1) to rodzina syntetycznych analogów kwasu all-trans-retinowego (ATRA), które wykazują silną fluorescencję solwatochromatyczną po wzbudzeniu światłem UV/fioletowym.1 W szeregu testów biologicznych fluorescencyjne sondy retinoidowe LightOx wykazują porównywalną, a w niektórych przypadkach silniejszą aktywność biologiczną niż ATRA i dlatego mogą być stosowane jako skuteczne zamienniki ATRA w szerokim zakresie testów, zwłaszcza tych z udziałem receptorów kwasu retinowego (RAR).2-5 LightOx17 (Rysunek 2) jest dłuższy niż inne analogi i nie wykazuje aktywności retinoidowej i jest dostarczany jako nieaktywna biologicznie sonda fluorescencyjna o podobnych właściwościach do innych pochodnych retinoidów.
![Fluorescent Retinoid Probes Struktury chemiczne fluorescencyjnych sond retinoidowych LightOx.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/articles/cell-culture-and-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/chemical-structures-of-lightox-fluorescent/chemical-structures-of-lightox-fluorescent.jpg)
Rysunek 1.Struktury chemiczne fluorescencyjnych sond retinoidowych LightOx.
![Fluorescent Retinoid Probes Struktura chemiczna niebioaktywnej fluorescencyjnej sondy retinoidowej LightOx.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/articles/cell-culture-and-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/chemical-structure-of-non-bioactive-lightox-fluorescent/chemical-structure-of-non-bioactive-lightox-fluorescent.jpg)
Rysunek 2.Struktura chemiczna niebioaktywnej fluorescencyjnej sondy retinoidowej LightOx.
Właściwości fotofizyczne
Fluorescencyjne sondy retinoidowe LightOx mogą być wzbudzane przez typowe źródła światła UV-A (np. zestaw filtrów DAPI) i fioletowego (405 nm). Emisja fluorescencji jest łatwo wykrywana w środowisku komórkowym przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego, w eksperymentach kuwetowych przy użyciu spektrofotometru oraz w formacie płytek dołkowych przy użyciu typowych czytników płytek.
Charakterystyka absorpcji i emisji jest wysoce solwatochromatyczna (Rysunki 3-4). W szczególności długość fali i intensywność emisji są silnie zależne od lokalnego środowiska: intensywne i przesunięte w kierunku niebieskim w środowiskach niepolarnych oraz słabsze i przesunięte w kierunku czerwonym w środowiskach polarnych. Na przykład w eksperymentach mikroskopowych umożliwia to pozyskiwanie informacji o środowisku oprócz zachowania lokalizacyjnego.1
![Fluorescent Retinoid Probes Widma absorpcyjne LightOx14 w różnych rozpuszczalnikach.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/articles/cell-culture-and-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/absorption-spectra-of-lightox14/absorption-spectra-of-lightox14.jpg)
Rysunek 3.Widma absorpcyjne LightOx14 w różnych rozpuszczalnikach.
![Fluorescent Retinoid Probes Widma emisji fluorescencji LightOx14 w różnych rozpuszczalnikach.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/articles/cell-culture-and-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/fluorescence-emission-spectra-of-lightox14/fluorescence-emission-spectra-of-lightox14.jpg)
Rysunek 4.Widma emisji fluorescencji LightOx14 w różnych rozpuszczalnikach.
Właściwości wiązania białek retinoidowych
Większość fluorescencyjnych sond retinoidowych LightOx wykazuje wysokie powinowactwo wiązania białek wiążących retinoidy, w tym receptorów kwasu retinowego (RAR) i komórkowego białka wiążącego kwas retinowy II (CRABPII) (Tabela 1) z wyjątkiem LightOx17, który nie jest białkiem wiążącym RAR. To silne wiązanie można wykorzystać do opracowania konkurencyjnych fluorometrycznych testów wiązania, w których przemieszczenie fluorescencyjnego retinoidu z docelowego białka można monitorować za pomocą emisji fluorescencji i wykorzystać do określenia względnego powinowactwa wiązania konkurencyjnego ligandu.
![Fluorescent Retinoid Probes LightOx Lewy i prawy obraz](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/articles/cell-culture-and-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/lightox-left-and-right/lightox-left-and-right.jpg)
Rysunek 5.Znakowanie żywych komórek keratynocytów naskórka HaCaT za pomocą LightOx14. Komórki w lewym i prawym panelu były znakowane przez 60 minut przed obrazowaniem. Po lewej: Znakowanie jądrowe za pomocą LightOx14 wykryte w małych skupiskach komórek proliferacyjnych. Po prawej: LightOx14 wykryty w przedziałach cytoplazmatycznych i jądrowych w częściowo zróżnicowanych komórkach.
Instrukcje przygotowania
Fluorescencyjne sondy retinoidowe LightOx są wysoce rozpuszczalne w DMSO i mogą być przygotowywane jako roztwór podstawowy do stężenia 10 mM.
Przechowywanie i stabilność
Fluorescencyjne sondy retinoidowe LightOx są stabilne w świetle i nie wymagają specjalnych środków ostrożności podczas stosowania. Roztwory w DMSO powinny być przechowywane w temperaturze od 4 do -20 oC w ciemności, a ich okres trwałości wynosi około 6 do 12 miesięcy.
Bezpieczeństwo i utylizacja
Próbki przed utylizacją należy poddać działaniu wybielacza.
Referencje
Informacje kontaktowe
Aby uzyskać najnowsze informacje odwiedź https://lightox.co.uk/imaging-probes/.
.Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?