Biuletyn dotyczący wypadania drożdży
Selekcja plazmidów w drożdżach opiera się na wykorzystaniu mutantów auksotroficznych, które nie mogą rosnąć bez określonego składnika pożywki (aminokwasu, puryny lub pirymidyny). Transformacja plazmidem zawierającym zmutowany gen umożliwia transformantowi wzrost na pożywce pozbawionej wymaganego składnika. Chociaż drożdże mogą rosnąć na syntetycznej pożywce bez aminokwasów, lepszą wydajność i tempo wzrostu można osiągnąć na bogatszych pożywkach. Posiadanie bogatszej pożywki zwiększa również prawdopodobieństwo udanych transformacji podczas przesiewania bibliotek lub wykonywania nokautów genów. Skład dodatków do pożywek przedstawiono w Tabeli 1 i jest on oparty na opublikowanych recepturach.1
Środki ostrożności i zastrzeżenia
Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczo-rozwojowego, a nie do celów farmaceutycznych, domowych lub innych. Informacje dotyczące zagrożeń i bezpiecznego obchodzenia się z produktem można znaleźć w karcie charakterystyki.
Instrukcje przygotowania
| Yeast Synthetic Drop-out Medium Supplement (Tabela 2 pokazuje odpowiednią ilość dla każdego suplementu) | 1.39-1.92 g/L | |
| Baza azotowa z drożdży bez aminokwasów (Nr produktu. Y0626) | 6.7 g/L | |
| Dla płytek dodać: Agar bakteriologiczny (Product No. A5306) | 20 g/L |
Przy przygotowywaniu płytek autoklawować tylko przez 15 minut; dłuższe autoklawowanie spowoduje, że agar stanie się miękki. Alternatywnie, agar można autoklawować oddzielnie od suplementu Synthetic Drop-out Medium Supplement i podłoża azotowego dla drożdży.
Po autoklawowaniu dodać:
Glukozę, 50% (w/v) roztwór 40 mL/L
(przygotowany z Product No. G7021, sterylizowany przez filtrację 0,2 mm)
Przechowywanie/Stabilność
Przechowywać suplementy pożywki w stanie wysuszonym w temperaturze pokojowej.
Wyniki
Wyniki testu wzrostu pożywki syntetycznej z odpowiednimi genotypami (Tabele 3 i 4).
Referencje
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?