Przygotowanie podłoża do hodowli drobnoustrojów

Rodzaje pożywek

Podłoża do hodowli drobnoustrojów powinny zapewniać optymalne warunki wzrostu dla wszystkich lub określonych rodzajów mikroorganizmów. Dokładny skład pożywki zależy od hodowanego gatunku i celu zastosowania. pH pożywki należy dostosować w zależności od mikroorganizmów. Podłoża do hodowli mikroorganizmów są klasyfikowane na podstawie kilku parametrów, takich jak składniki chemiczne, charakter fizyczny i funkcja. Rodzaje pożywek zdefiniowane przez te parametry opisano poniżej.

Klasyfikacja pożywek do hodowli drobnoustrojów według składu chemicznego

Podłoże syntetyczne to podłoże o określonym składzie chemicznym, powszechnie stosowane do hodowli fotoautotrofów, takich jak cyjanobakterie i protisty fotosyntetyzujące. Jest szeroko stosowana w badaniach nad metabolizmem mikroorganizmów.

Podłoże złożone to podłoże zawierające nieokreślone składniki chemiczne, takie jak pepton, ekstrakt mięsny i ekstrakt drożdżowy, które spełniają wymagania żywieniowe różnych mikroorganizmów. Służy do hodowli drobnoustrojów o złożonych wymaganiach żywieniowych.

Podłoża do hodowli drobnoustrojów oparte na naturze fizycznej

Podłoże stałe wykorzystuje 1-7% agar-agar lub 10-20% żelatynę do zestalenia płynnego bulionu. Podłoże stałe jest używane do izolowania różnych drobnoustrojów od siebie, tworzenia czystych kultur, wykonywania skosów agarowych i wykonywania kłuć agarowych.

Podłoże płynne nie zawiera żadnych środków zestalających. Po zaszczepieniu i inkubacji komórki stają się widoczne w postaci niewielkiej masy lub rozmycia bulionu.

Podłoża do hodowli drobnoustrojów w oparciu o metodę przygotowania

Podłoże gotowe do użycia to stałe lub płynne podłoże dostarczane w płytkach, butelkach, probówkach lub innych pojemnikach, w postaci gotowej do użycia lub gotowej do użycia po przetopieniu i uzupełnieniu.

Pożywka przygotowana z komercyjnie odwodnionych preparatów to pożywka w postaci suchej, która wymaga ponownego uwodnienia i przetworzenia przed użyciem, w wyniku czego uzyskuje się pożywkę kompletną lub niekompletną, do której przed użyciem dodaje się suplementy.

Pożywka przygotowana z poszczególnych składników to pożywka wyprodukowana przez laboratorium mikrobiologiczne w całości z jej poszczególnych składników.

Podłoże na żądanie jest produkowane przez system, który utrzymuje wysoce skoncentrowane, sterylne podłoże hodowlane dostępne w laboratorium przez kilka dni. Poprzez rozcieńczenie sterylną wodą może on wytworzyć wymaganą ilość gotowej do użycia pożywki na żądanie, bez konieczności autoklawowania.

Przygotowanie pożywki do hodowli drobnoustrojów

Przygotowanie pożywki z odwodnionych preparatów handlowych powinno odbywać się zgodnie z instrukcjami producenta. Skład podstawowych składników, takich jak peptony, ekstrakty drożdżowe, agar, substancje buforujące i antybiotyki, jest modyfikowany w celu uzyskania konsystencji pożywki. Wymagana ilość odwodnionej pożywki lub poszczególnych składników jest rozpuszczana w wodzie destylowanej poprzez ciągłe mieszanie, a następnie podgrzewanie (jeśli to konieczne). Pożywki zawierające agar powinny być odpowiednio namoczone z odpowiednim mieszaniem przed podgrzaniem. Należy wyregulować pH, a podłoże jest dozowane do odpowiednich pojemników w celu sterylizacji za pomocą wilgotnego ciepła w autoklawie. Substancje wrażliwe na ciepło (np. białka, enzymy) są sterylizowane za pomocą filtrów membranowych.

Podłoża hodowlane muszą być przechowywane w określonych temperaturach, aby zapobiec modyfikacji składu i nie dłużej niż okres trwałości produktu. Aseptyczne przygotowanie i przechowywanie są niezbędne do ochrony pożywek przed infekcją mikrobiologiczną. Utrata wody podczas przechowywania może być zminimalizowana poprzez nieprzepuszczalne opakowanie i/lub przechowywanie w temperaturze 5 °C ± 3 °C. Degradację chemiczną, np. utlenianie lub utratę właściwości przeciwdrobnoustrojowych, można opóźnić poprzez ochronę przed światłem, ciepłem i odwodnieniem.