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安全性情報

CAS9D10AP

Sigma-Aldrich

CRISPR Cas9-D10Aニッカーゼプラスミド

別名:

CAS9D10A プラスミド

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About This Item

UNSPSCコード:
12352200
NACRES:
NA.51

リコンビナント

expressed in E. coli

品質水準

200

包装

vial of 50 μL

濃度

20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)

アプリケーション

CRISPR

プロモーター

Promoter name: CMV

selection

kanamycin

輸送温度

dry ice

保管温度

−20°C

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詳細

CRISPR Cas9-D10A Nickase発現プラスミドには、Cas9の強力な一過性発現のためにCMVプロモーターを用いています。MluIとNheIを用いてCMVを別のプロモーターに置換することが可能です。また、T7によるmRNA産生のため、XbaIを用いてCas9-D10A発現プラスミドを直線化することが可能です。

アプリケーション

機能ゲノミクス／標的バリデーション
  • 複数の細胞株における遺伝子ノックアウトの作成
  • RNAiに適さない遺伝子の完全なノックアウト
  • プロモーター、融合タグ、またはレポーターを内在性遺伝子に組み込んだノックイン細胞株の作製

特徴および利点

Cas9-D10Aベクターは、どのU6-guideRNAプラスミドとも組み合わせて用いることができます。Cas9とguideRNAの量を変えてCas9/gRNA比を最適化することができます。最近のエビデンスで、CRISPRエンドヌクレアーゼによるオフターゲット効果が重大な問題であることが示唆されました。この問題に対処するため、シグマはCRISPRのDNA認識鎖長をZFNやTALENと同程度に延長するため、ニッカーゼペアを用いる技術を開発しました。弊社の経験によると、Cas9-D10A変異体ではニッカーゼペアを用いて最も信頼性の高い結果が得られました。開発中、有効なニッカーゼペアの生成に欠かせない要素は5′末端間のgRNAの位置であることもわかりました。プラスミドによるCRISPRニッカーゼペアの送達には、Cas9-D10A発現ベクターと2種類のU6-gRNAベクターによる3プラスミドシステムを用いることを推奨します。ニッカーゼペアを簡単にご利用いただけるよう、シグマはプレデザインニッカーゼペアのライブラリーにアクセスできるオンラインツールを用意しています。シグマのオンラインCRISPR製品カタログで最新のデザインセットをご確認ください。

構成

1バイアルあたり1 μgのCas9-D10Aニッカーゼプラスミドを含みます。

製品にはガイドRNAは含まれないことにご留意ください。こちらは、Custom CRISPR製品タブから別個に購入していただく必要があります。

原理

CRISPR/Casシステムは、細菌や古細菌が有するウイルスやプラスミドの侵入に対する防御機構です。近年、細菌Streptococcus pyogenes由来のII型CRISPR/Casシステムが、単一のCas9タンパク質と非コーディングガイドRNA（gRNA）の2つの分子成分を用いて真核生物系で機能するように設計されました。Cas9エンドヌクレアーゼは、gRNAでプログラムすることができ、目的のゲノム位置でDNA二本鎖切断（DSB）を誘導します。Znフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は内因性DNA修復プロセス（非相同末端結合（NHEJ）または相同性指向修復（HDR））を活性化して、標的とされたDSBを修復します。

物理的形状

シグマのCas9-D10A NickaseプラスミドDNAは、50μL中20 ng/μLの濃度で提供されます。

調製ノート

シグマのCRISPRプラスミド製品はミニプレップアリコートとして提供され、特定の細胞へのトランスフェクションには適していない可能性があります。最良の結果を得るため、トランスフェクションの前にエンドトキシンフリーDNA精製キットを用いてプラスミドをマキシプレップすることをお勧めします。

その他情報

DNAの二本鎖切断を媒介するには、2つのU6-gRNAプラスミドを併用する必要があります。

文献で報告されている一般的なトランスフェクション濃度は、Cas9プラスミドが1.0 μg/μL以上 5 μL以下、U6-gRNAプラスミドが1.0 μg/μL以上、5 μL以下の範囲です。（上記の用量は50〜100万個の細胞をヌクレオフェクションすると仮定しています）

法的情報

CRISPR使用許諾契約

保管分類コード

12 - Non Combustible Liquids

WGK

WGK 1

引火点(°F)

Not applicable

引火点(℃)

Not applicable

適用法令

試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。

Jan Code

CAS9D10AP-1SET:
CAS9D10AP-BULK:
CAS9D10AP-1EA-KC:
CAS9D10AP-1EA:

試験成績書（COA）

製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。

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資料

Tips for Cell Engineering using Cas9-GFP CRISPR plasmids

CRISPR endonucleases have shown wide variation in their activity, even among multiple CRISPRs designed within close genomic proximity.

CRISPR/Cas-GFP Vectors for Rapid Expression Verification and Enrichment of Genome Edited Cells

View experimental data showing crispr/cas expression and enrichment using FACS

Tips for Cell Engineering using Cas9-GFP CRISPR plasmids

CRISPR endonucleases have shown wide variation in their activity, even among multiple CRISPRs designed within close genomic proximity.

プロトコル

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ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.

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