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Merck

LIBDL-RO

Roche

リベラーゼDLリサーチグレード

low Dispase concentration

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About This Item

UNSPSCコード:
12352200

形状

lyophilized

包装

pkg of 100 mg (05466202001 [2 x 50 mg])
pkg of 10 mg (05401160001 [2 x 5 mg])

メーカー/製品名

Roche

パラメーター

35-37 °C optimum reaction temp.

最適pH

7.4

輸送温度

dry ice

保管温度

−20°C

詳細

リベラーゼDH研究グレードには、高度に精製されたコラゲナーゼIおよびコラゲナーゼIIが含まれています。これら2種類のコラゲナーゼのアイソフォームが正確な比率でブレンドされ、非クロストリジウム性の中性プロテアーゼであるディスパーゼ®が高濃度で配合されています。組織分散で高い細胞回収量と生存率を得るためには酵素ブレンドの純度が高いことが必要とされますが、高純度のリベラーゼDL(低ディスパーゼ)研究グレードは広範囲のタイプの組織分散に使用されています。エンドトキシンなどの細菌副産物が、最大で数千分の1まで低減します。

アプリケーション

マウスから皮膚幹細胞を単離するために、リベラーゼ®DL(低ディスパーゼ)研究グレードが使用されています。また、組織分散で高い細胞回収量と生存率を得るためには酵素ブレンドの純度が高いことが必要とされますが、高純度のリベラーゼDLは広範囲のタイプの組織分散に使用されています。エンドトキシンなどの細菌副産物が、最大で数千分の1まで低減します。

特徴および利点

  • クロストリパインとトリプシンの活性が低く、エンドトキシンの含量を抑えた酵素ブレンドを用いることで、分離細胞の生存率と収率を最大化します。
  • この酵素ブレンドは、コラゲナーゼI + IIの純度(HPLC分析により測定)が高いことから、高い比活性を期待できます。
  • ロット間の一貫性が高いため、実験の再現性が高くなります。

調製ノート

安定化剤:Calcium
ワーキング濃度:リベラーゼリサーチグレード酵素ワーキング濃度

リベラーゼ酵素は、従来のコラゲナーゼよりも非常に高い比活性を示します。これはmg/mLを単位として表記されるリベラーゼリサーチグレード精製酵素のワーキング濃度が、従来のコラゲナーゼの使用濃度よりも低いことを意味します。

アプリケーションがwww.collagenase.comで示されたRocheのアプリケーションリストにある場合、そのアプリケーションに推奨されるリベラーゼリサーチグレードの濃度を用いてください。

アプリケーションがこのリストに記載されていない場合は、最初に0.08~0.28 Wünsch units/mLの濃度でリベラーゼTMリサーチグレードを使用してください。

リベラーゼリサーチグレード酵素混合物の最適な開始濃度を決定することが望まれます。これは出発点であり、手順の違いや従来のコラゲナーゼのロット間の違いにより、最終濃度が変わる場合があります。

コラゲナーゼワーキング濃度

前のコラゲナーゼワーキング濃度(mg/mL)とその比活性(Wünsch単位/mg、[上記で決定])を掛ければ、Wünsch単位/mLが得られます。使用するリベラーゼリサーチグレード酵素混合物の量を決定するために、まず、コラゲナーゼワーキング濃度(Wünsch単位/mL)にワーキング酵素溶液の総量を掛けて、必要な総コラゲナーゼ活性(Wünsch単位)を得てください。次に、必要な総コラゲナーゼ活性をリベラーゼリサーチグレード保存溶液濃度で割ります(「再構成と保存」)。これはワーキング酵素溶液に使用するリベラーゼリサーチグレード酵素混合物保存溶液のミリリットル数を示しています。
保存条件(ワーキング溶液):未使用の保存溶液は、単回使用のアリコートにして-15~-25°Cで保管してください。製品の安定性に関する詳細については、Rocheリベラーゼ酵素のウェブサイトをご覧ください。www.collagenase.com.

注:凍結融解の繰返しはしないでください。

再構成

注射品質の滅菌水または組織解離緩衝液を用いて、凍結乾燥酵素を再構成します。血清、またはアルブミンやプロテアーゼ阻害剤など酵素活性に影響を及ぼし得る他の構成要素を解離緩衝液に添加しないでください。酵素の安定性は、より高い濃度およびより温かい温度(4°C)にすると低下します。上記の条件はいずれも避けてください。

全バイアルを復元調製してください。凍結乾燥物の個々のアリコートを計量しないでください。バイアルの中に水分が混入すると、酵素活性が低下します。

バイアルを氷上に置き、凍結乾燥した酵素を再水和します。

酵素が完全に溶解するまで、2~8°Cでバイアルを穏やかに攪拌(最大30分間)してください。

リベラーゼリサーチグレード精製酵素混合物を溶解するために使用する組織解離緩衝液の種類によっては、わずかな沈殿が希釈されたワーキング溶液に容易に溶解し、酵素活性に影響しないことが観察される場合もあります。

保存溶液のアリコートを取り出し、ワーキング溶液を調製してください。

再構成用量

2 mL(1バイアルに5 mg~10 mg入り)
10 mL(1バイアルに50 mg~100 mg入り)

コラゲナーゼWünsch (単位/mL)

13(1バイアルに5 mg~10 mg入り)
26(1バイアルに50 mg~100 mg入り)

総コラゲナーゼ濃度[mg/mL]

2.5(1バイアルに5 mg~10 mg入り)
5.0(1バイアルに50 mg~100 mg入り)

その他情報

生命科学研究用途に限ります。診断に使用しないでください。

法的情報

Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.
Liberase is a trademark of Roche
Roche is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

ピクトグラム

Exclamation markHealth hazard

シグナルワード

Danger

危険有害性情報

危険有害性の分類

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

ターゲットの組織

Respiratory system

保管分類コード

11 - Combustible Solids

WGK

WGK 1

引火点(℃)

does not flash


試験成績書(COA)

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Maria Fernanda Forni et al.
PloS one, 10(10), e0140143-e0140143 (2015-10-16)
The skin is a rich source of readily accessible stem cells. The level of plasticity afforded by these cells is becoming increasingly important as the potential of stem cells in Cell Therapy and Regenerative Medicine continues to be explored. Several

資料

Enzyme Explorer Key Resource: Collagenase Guide.Collagenases, enzymes that break down the native collagen that holds animal tissues together, are made by a variety of microorganisms and by many different animal cells.

ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.

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