遺伝子発現・サイレンシング
遺伝子発現の制御は、生物学的プロセスをコントロールする複雑な遺伝子ネットワークについて研究している研究者が活用する、最もパワフルな技術の1つです。特に、遺伝子制御実験は、がんから発達障害および神経変性疾患に至るまで、疾患との闘いに効果の高い治療薬を特定するために広く用いられています。
細胞や組織における遺伝子発現の効果的な制御に用いられる技術は多数存在します。RNAi（RNA干渉）は自然の生物学的機序であり、二本鎖siRNA（低分子干渉RNA）により標的遺伝子発現の強力な阻害を誘導します。Sigma-Aldrich®アドバンストゲノミクスは研究者向けの市販のRNAi製品開発をリードしてきました。
最近では、CRISPR干渉（CRISPRi）とCRISPR活性化（CRISPRa）が開発され、研究者にとってほぼ制限のない遺伝子制御オプションを実現する新しいパワフルなツールセットとなっています。Sigma-Aldrich®アドバンストゲノミクスの比類なきCRISPR製品のポートフォリオを活用することで、ほぼすべての遺伝子の正確かつ効率的なノックダウン、ノックアウト、活性化、過剰発現ができるようになりました。
関連技術資料
- ハイレベルなRNAi研究のため、メルクはバイオインフォマティクスのリーダーとして知られるRosetta Inpharmatics社と提携しています。Rosetta Inpharmatics社から導入し、メルクが独占的権利を有するsiRNA設計アルゴリズムは、RNAi用に性能をアップさせるため3年以上開発を続け、最適化を図ってきました。
- 遺伝子発現解析へのアプローチの一つは、遺伝子のmRNA濃度の測定です。この解析には、異なる転写物間の半減期の差、転写物の時間的なパターン、mRNAとタンパク質との間の相関の欠落など、いくつもの課題があります。
- RNAi実験の導入を成功に導く一連のベクター
- Enzyme Explorer Product Application Index for Superoxide Dismutase offered by us online. Superoxide Dismutase (SOD) catalyzes the reduction of superoxide anions to hydrogen peroxide.
- トランスフェクションは、真核細胞にDNA、RNAまたはタンパク質を導入することであり、遺伝子発現の調節や研究に広く用いられています。トランスフェクション技術は、遺伝子機能、タンパク質合成、細胞増殖や発生の解析を容易にする分析ツールとして役立ちます。
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関連プロトコル
- 懸濁細胞のレンチウイルスの形質導入（トランスダクション）の詳細な手順本プロトコルでは、MISSION TRC shRNAレンチウイルス粒子を、懸濁細胞での長期的な遺伝子サイレンシングおよび表現型観察に使う方法について紹介します。
- FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting) provides a method for sorting a mixed population of cells into two or more groups, one cell at a time, based on the specific light scattering and fluorescence of each cell. This method provides fast, objective, and quantitative recording of fluorescent signals from individual cells.
- Method for purification, reverse transcription and quantitative PCR for MicroRNAs using Mysticq reagents
- Experimentally determine the appropriate antibiotic concentration for selecting stable cell lines. This titration protocol can determine the lowest concentration of puromycin needed to efficiently select transduced cells.
- Preparation of the Lentiviral Transduction Particles Using Packaging Plasmid Mix
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技術資料・プロトコールの検索
細胞におけるshRNAおよびsiRNA介在性遺伝子サイレンシングの作用フローを示す模式図
RNAi－遺伝子経路を解明する遺伝子制御
機能ゲノミクススクリーニングは創薬研究にとって不可欠であり、生体系、生物学的経路、および疾患の機序を解明することが可能になります。これらの複雑な分子間相互作用ネットワークを効果的に調査するには、高精度・高効率・長期間のノックダウンが可能なshRNAライブラリーが必要です。
Sigma-Aldrich®アドバンストゲノミクスは、RNAiコンソーシアム（TRC）が開発したTRC1.5およびTRC2ラインナップの独占プロバイダーです。卓越したカバー率をもたらすレンチウイルスベースのshRNAライブラリーは、全ゲノム、個々のRNAiクローン／ベクター、遺伝子ファミリーセットを含む複数のフォーマットで利用できます。
CRISPRiおよびCRISPRa－パワフルな遺伝子阻害および遺伝子活性化
CRISPRi（CRISPR干渉）およびCRISPRa（CRISPR活性化）は、基本となるDNA配列を変化させることなく、遺伝子のきわめて効率的なサイレンシングと活性化をそれぞれ実現します。大規模LOF（loss-of-function）およびGOF（gain-of-function）スクリーニングで使用すると、他の手法では見落とされがちな、特有であるが機能的には関連のある遺伝子経路を特定することが可能です。
Synergystic Activation Mediator complex（SAM）によるCRISPRaおよびKRABドメインを用いたCRISPRiの模式図。
Sigma-Aldrich®アドバンストゲノミクスは、遺伝子ノックダウン・過剰発現実験に必要な、最適化されたCRISPRiおよびCRISPRaライブラリー一式を提供します。プール型CRISPRi・SAM CRISPRaのレンチウイルスライブラリーは、市販の製品、あるいは特定のニーズに合わせてカスタマイズしたものを利用できます。
お客様のプロジェクトにCRISPRをご検討の場合は、Sigma-Aldrich®アドバンストゲノミクスのエキスパートにお問い合わせください。
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