ベクターマップ
MISSION®研究開発チームは、the RNAi Consortium（TRC）の科学者との連携により、RNAi実験の導入を成功に導く一連のベクターを作成してきました。基本ベクターのpLKO.1-puroは、TRCの一部のBroad Instituteで開発されました。私たちは、カスタムshRNA生産用ベクターに加えて、クリティカルコントロール実験用のさまざまなベクターをTRCに提供しています。このページには、これらのベクターに関する情報が記載されています。
pLKO.1-puroシーケンス（shRNAインサートなし）
TRC1.5ベクター：pLKO.1-puro
TRC1.5コントロールベクター
TRC1.5代替ベクターバックボーン
TRC2ベクター：TRC2-pLKO-puro
誘導shRNAベクター
レンチウイルスパッケージングベクター
参考文献
TRC1.5ベクター：pLKO.1-puroベクターおよび使用
TRC1.5クローンのベクターバックボーンは、TRC1クローンとまったく同じです。
pLKO.1-puroベクターの機能は、shRNAの一過的または安定的なトランスフェクションおよびレンチウイルス粒子の産生を可能にします。1 ピューロマイシン選択マーカーを使用して安定的な遺伝子サイレンシングを選択することができ、また適合するパッケージングプラスミドとの同時導入により、自己不活化している複製能力のないウイルス粒子をパッケージング細胞（HEK293T）によって産生することができます。2,3 49,000以上のバリデーション済みクローンを含む約200,000ものクローンがTRC1.5に含まれているのは、私たちのポートフォリオのみです。これには、TRC1から得られるすべてのコンテンツに、2,661の新しいヒト遺伝子と2,395のマウス遺伝子を標的にする39,212の追加クローンがプラスされています。アデノウイルスやマウスベースのMMLVまたはMSCVレトロウイルス系とは違い、レンチウイルス系粒子では、効率的な感染ならびにニューロンや樹状細胞など分化細胞および非分裂細胞への特定のshRNA構築物の組み込みが可能となるため、これらの細胞株を使用する際の低いトランスフェクション率と組み込みの困難さが払拭されます。siRNAやその他のベクターベースのシステムと比較すると、pLKO.1-puroは長期間のノックダウンと表現型観察のためのソリューションを提供して、困難なまたはセンシティブな細胞株（非分裂細胞または初代細胞）の形質導入をもたらす、経済的で再生可能なリソースです。
shRNAインサートがある場合、pLKO.1-puroプラスミドの長さは下記のベクターマップに示されているように7,086 bpです。shRNAインサートがない場合、pLKO.1-puroベクターの長さは7,052 bpです。得られるシーケンスファイルは、空のpLKO.1-puroベクター（7,052 bp）です。
TRC1.5ベクターの説明と特徴
TRC1.5代替ベクターバックボーン
私たちは、標準のshRNA製品の一部として、さまざまな代替ベクターバックボーンを提供しています。カスタマイズ可能なMISSION® shRNA注文インターフェイスを用いると、これらのベクターバックボーンに含まれるTRC shRNAを、プラスミドDNAまたはレンチウイルス粒子のクローン詳細ページで直接オンライン注文できます。カスタムヘアピンのご注文の詳細については、カスタムクローニングページをご覧ください。
私たちは、蛍光タンパク質またはUbCプロモーターを備える、いくつかの代替ベクターバックボーンを提供しています。これらのコンストラクトは、カスタムオプションとしてのみ入手できます。ご注文の詳細については、カスタムクローニングページをご覧ください。
TRC2ベクター：TRC2-pLKO-puroベクターおよび使用
TRC2-pLKO-puroベクターも、shRNAの一過的または安定的なトランスフェクションおよびレンチウイルス粒子の産生を可能にします。TRC1.5ベクターとTRC2ベクターの違いは、WPRE（すなわち、Woodchuck Hepatitis Post-Transcriptional Regulatory Element）が追加されていることだけです。4 これにより、レンチウイルスによってデリバリーされた導入遺伝子の発現増強が可能になります。5 TRC1.5と同様に、ピューロマイシン選択マーカーの使用により安定的な遺伝子サイレンシングが達成されます。自己不活性化複製不全ウイルス粒子は、適合するパッケージングプラスミドとの同時導入により、パッケージング細胞（HEK293T）において産生することができます。TRC2-pLKO-puroは、安定的で長期間のノックダウンと表現型観察のためのソリューション、困難なまたはセンシティブな細胞株（非分裂細胞または初代細胞）の形質導入、および導入遺伝子の発現増強をもたらします。
shRNAインサートがある場合、TRC2-pLKO-puroプラスミドの長さは下記のベクターマップに示されているように7,518 bpです。shRNAインサートがない場合、TRC2-pLKO-puroベクターの長さは7,484 bpです。得られるシーケンスファイルは、空のTRC2-pLKO-puroベクター（7,484 bp）です。
TRC2-pLKO-puroシーケンス（shRNAインサートなし）
TRC2ベクターマップ（TRC2-pLKO-puro）
注記：現在、TRC2に使用できる代替ベクターバックボーンはありません。
誘導shRNAベクター
pLKOベクターは設計が見直されて、LacI（リプレッサー）と、LacO（オペレーター）配列を伴う修飾ヒトU6 shRNAプロモーターが追加されています。IPTG（イソプロピル-β-D-チオ-ガラクトシド）非存在下では、ラクトース類似体のLacIがLacOと結合してshRNAの発現を防止します。IPTGが存在する場合は、アロステリックなLacIリプレッサーが構造を変化させて、lacO修飾ヒトU6プロモーターから自らを放出し、その後にshRNAの発現を可能にします。
私たちは、2種類のIPTG誘導ベクターを皆様の研究用に提供していることを誇りに思います。優先的誘導ベクターのpLKO-puro-IPTG-3xLacOは、3つのlacオペロン配列（2つはU6プロモーター内で1つはプロモーターの3'）を含み、厳密な調節と大規模な遺伝子サイレンシングの両方をもたらします。これに対して、pLKO-puro-IPTG-1xLacOベクターは1つのlacオペロン配列をU6プロモーター内に含み、shRNA発現に対する利点をもたらしますが、誘導されていないプロモーターの調節は緩やかになります。
参考文献
お問い合わせ
ライブラリー、価格、見積り、その他の点については、Eメールにてお問い合わせください。sialjpcs@merckgroup.com
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