BGALA-RO

ββ-glicuronidase/arilsulfatase

from Helix pomatia

• Sinônimo(s): arilsulfatase/β-glicuronidase, sulfatase/β-glicuronidase
• Código UNSPSC: 12352204

Propriedades

• fonte biológica: animal (Helix pomatia)
• Nível de qualidade: 100
• Formulário: solution
• embalagem: pkg of 10 mL (10127698001); pkg of 2 mL (10127060001)
• fabricante/nome comercial: Roche
• técnica(s): ELISA: suitable
• cor: colorless to brown
• pH ideal: 4.5-5.0
• solubilidade: water: miscible
• aplicação(ões): life science and biopharma; sample preparation
• temperatura de armazenamento: 2-8°C

Descrição

Descrição geral

βA ß-glicuronidase/arilsulfatase de Helix pomatia é o preparado enzimático com atividade de sulfatase mais amplamente utilizado e tem uma especificidade muito ampla. É uma mistura bruta de enzimas e sua preparação não requer nenhum tipo de separação cromatográfica. Este preparado contém atividade de glicuronidase e de sulfatase. A hidrólise enzimática antes da detecção é essencial para atingir alta sensibilidade durante a análise. Após a hidrólise, a amostra pode ser analisada por espectrometria de massa, cromatografia gasosa, HPLC ou imunoensaios. Para análise de doping, tanto a atividade da sulfatase quanto a atividade da glicuronidase são essenciais para detectar todos os conjugados de fármacos presentes na amostra. βA β-glicuronidase/arilsulfatase é usada para hidrólise enzimática de glicuronídeos e ésteres sulfatados em fluidos biológicos e principalmente na urina.

Especificidade

βA β-glicuronidase/arilsulfatase tem uma ampla especificidade para muitos tipos de β-glicuronídeos e ésteres sulfatados.

Especificidade da β-glicuronidase:
Os glicosídeos que o ácido β-D-glicurônico forma com diversos compostos que contêm grupos hidroxila se hidrolisam prontamente na presença de β-glicuronidase.

• Esses compostos incluem esteroides, como estriol (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), androsterona, pregnandiol, tetra-hidrocortisona,
• fenois, como fenolftaleína (K_m = 0,39 mM), 4-nitrofenol, 4-metilumbeliferona,
• fármacos como cloranfenicol e tetra-hidrocanabiois,
• e metabólitos, como tiroxina e bilirrubina.

Os polissacarídeos que contêm resíduos de ácido β-glicurônico, como ácido hialurônico, também são hidrolisados.
βA ß-glicuronidase é altamente específica para a parte do carboidrato: nem os α-glucosídios nem os ácidos β-glicosidurônicos são hidrolisados. Contudo, a natureza do resíduo ligado ao resíduo do ácido β-glicurônico é pouco importante.

Atividade específica: 5,5 U/ml a +38 °C com fenolftaleína-β-glicuronídeo como substrato (4,5 U/ml a +25 °C com 4-nitrofenil-β-D-glicuronídeo como substrato = 100.000 unidades de Fishman/ml a +38 °C com fenolftaleína-β-glicuronídeo como substrato). 1 unidade de Fishman libera 1 μg de fenolftaleína do fenolftaleína-β-glicuronídeo em 1 hora a +38 °C.

Especificidade da arilsulfatase:
Os ésteres sulfatados de muitos fenóis são hidrolisados na presença da arilsulfatase. Exemplos incluem esteroides sulfatados, como sulfato de estrona, 4-nitrofenil sulfato de hidrogênio (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), 4-nitro-pirocatecol 2-sulfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) e dissulfato de fenolftaleína.

Atividade específica: 2,6 U/ml a +38 °C com dissulfato de fenolftaleína como substrato (14 U/ml a +25 °C com 4-nitrofenil sulfato como substrato = 800.000 unidades de Roy/ml a +38 °C com 2-hidroxi-5-nitrofenil sulfato como substrato). 1 unidade de Roy libera 1 μg de 2-hidroxi-5-nitrofenil sulfato em 1 hora a +38 °C.

Especificidade da β-glicuronidase:
Os glicosídeos que o ácido β-D-glicurônico forma com diversos compostos que contêm grupos hidroxila se hidrolisam prontamente na presença de β-glicuronidase.

• Esses compostos incluem esteroides, como estriol (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), androsterona, pregnandiol, tetra-hidrocortisona,
• fenois, como fenolftaleína (K_m = 0,39 mM), 4-nitrofenol, 4-metilumbeliferona,
• fármacos como cloranfenicol e tetra-hidrocanabiois,
• e metabólitos, como tiroxina e bilirrubina.

Os polissacarídeos que contêm resíduos de ácido β-glicurônico, como ácido hialurônico, também são hidrolisados.
βA ß-glicuronidase é altamente específica para a parte do carboidrato: nem os α-glucosídios nem os ácidos β-glicosidurônicos são hidrolisados. Contudo, a natureza do resíduo ligado ao resíduo do ácido β-glicurônico é pouco importante.

Especificidade da arilsulfatase:
Os ésteres sulfatados de muitos fenóis são hidrolisados na presença da arilsulfatase. Exemplos incluem esteroides sulfatados, como sulfato de estrona, 4-nitrofenil sulfato de hidrogênio (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), 4-nitro-pirocatecol 2-sulfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) e dissulfato de fenolftaleína.

Aplicação

βA β-glicuronidase/arilsulfatase vem sendo usada amplamente em laboratórios de pesquisa e de análise para hidrólise enzimática simultânea de β-glicuronídeos esteroides e ésteres sulfatados. A enzima é usada durante a preparação de amostras para clivar os glicuronídeos e ésteres de sulfato antes da realização de GC-MS, HPLC, imunoensaios ou outros métodos analíticos, incluindo análise de doping e hidrólise de conjugados esteroides (glicuronídeos) e ésteres sulfatados em urina e outros fluidos corporais.

Características e benefícios

• Desconjugue e detecte glicuronídeos e ésteres sulfatados.
• Detecção rápida de esteroides, benzodiazepinas, canabinoides, opioides e outras drogas.

Componentes

EC 3.1.6.1 e 3.2.1.31

Princípio

A glicuronidação é um dos princípios básicos do metabolismo. A maioria das substâncias apresentadas ao corpo humano são submetidas a processamento metabólico que inclui conjugação com ácido glicurônico por UDP-glicuronosiltransferases (UGTs). Esta enzima catalisa a transferência do grupo glicuronil para várias moléculas endógenas e exógenas biológicas e farmacologicamente ativas. O glicuronídeo é, em geral, mais solúvel, menos tóxico e excretado com maior facilidade pelo corpo humano que a molécula original.
Além disso, pode ocorrer sulfatação do fármaco ou substância química por sulfotransferases no organismo humano. De modo geral, a sulfatação é menos previsível que a glicuronidação, já que existem muitas isoenzimas de sulfotransferase e há diferenças específicas na proporção de glicuronidação e sulfatação da substância.

Definição da unidade

Glicuronidase:
Unidade padrão
A unidade padrão da atividade da β-glicuronidase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de 4-nitrofenol do ácido (4-nitrofenil) β-D-glicosidurônico, em uma temperatura de +25 °C e pH 4,5, em 1 μM.
Unidade de fenolftaleína
A unidade de fenolftaleína da atividade da β-glicuronidase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de fenolftaleína do composto fenolftaleína ácido β-D-glicosidurônico, em uma temperatura de +38 °C, em 1 μM.
Cerca de 4,5 unidades-padrão equivalem a 5,5 unidades de fenolftaleína.
Unidade de Fishman
A unidade de Fishman da atividade da β-glicuronidase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de fenolftaleína do composto fenolftaleína-ácido β-D-glicosidurônico, em uma temperatura de +38 °C, em 1 μg.
Cerca de 1 unidade-padrão equivale a 22.000 unidades de Fishman (1 unidade de fenolftaleína equivale a 19.000 unidades de Fishman).
Arilsulfatase:
Unidade padrão
A unidade padrão da atividade da arilsulfatase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de 4-nitrofenol do 4-nitrofenil sulfato, em uma temperatura de +25 °C e pH 6,2, em 1 μM.
Unidade de fenolftaleína
A unidade de fenolftaleína da atividade da arilsulfatase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de fenolftaleína do dissulfato de fenolftaleína, em uma temperatura de +38 °C e pH 6,2, em 1 μM.
Cerca de 5,4 unidades-padrão equivalem a 1 unidade de fenolftaleína.
Unidade de Roy
A unidade de Roy da atividade da arilsulfatase é a atividade enzimática que aumenta a taxa de liberação de 4-nitropirocatecol do 2-hidróxi-5-nitrofenil hidrogênio sulfato (4-nitropirocatecol 2-sulfato), em uma temperatura de +38 °C e pH 6,2, em 1 μg.
Cerca de 1 unidade-padrão equivale a 57.000 unidades de Roy (1 unidade de fenolftaleína equivale a 308.000 unidades de Roy).

forma física

Solução em solução salina, estabilizada

Nota de preparo

Concentração de trabalho: Em muitas aplicações, o produto pode ser diluído em água imediatamente antes do uso ou usado não diluído.
Obs.: Este preparado de β-glicuronidase/arilsulfatase é muito concentrado e deve ser diluído para algumas aplicações. Além disso, no preparado de protoplastos, a concentração exata a ser utilizada para uma determinada cepa de levedura deve ser determinada empiricamente.
Condições de armazenamento (solução de trabalho): Observação: Alíquotas do preparado diluído podem ser armazenadas a -15 ºC a -25 °C; elas não devem ser descongeladas e recongeladas mais do que uma ou duas vezes, e o armazenamento na temperatura mais baixa não prolonga sua validade além da validade do produto mantido a 2 ºC a 8 °C.

Armazenamento e estabilidade

Evite congelar e descongelar repetidamente (mais de duas vezes).

Outras notas

Somente para fins de pesquisas biológicas. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): nwg
• Ponto de fulgor (°F): No data available
• Ponto de fulgor (°C): No data available