Ustawianie limitów ciśnienia dla chromatografii wykluczania wielkości

Ciśnienie jest generowane przez przepływ przez system chromatograficzny. Dla optymalnej funkcjonalności chromatografii ważne jest zrozumienie zasady spadku ciśnienia w różnych częściach systemu (rys. 1.11).

.

Rysunek 1.11. Przykład ciśnienia w różnych częściach systemu podczas pracy kolumny. Należy pamiętać, że wartości ciśnienia służą jedynie do zilustrowania zasady działania.

• ∆p_before nie ma wpływu na kolumnę.
• Ciśnienie na osprzęcie kolumny jest sumą ∆p_after i ∆p. Nie należy przekraczać limitu sprzętu kolumny!
• ∆p jest indywidualne i należy je określić dla każdej kolumny.

Więcej informacji można znaleźć w podręczniku ÄKTATM Laboratory-scale Chromatography Systems Instrument Management Handbook, 29-0108-31.

W celu ochrony sprzętu kolumny i złoża wypełnionego medium chromatograficznego ważne jest ustalenie limitów, których nie można przekroczyć podczas pracy. Istnieją dwa ważne limity ciśnienia, które należy wziąć pod uwagę:

1. W celu ochrony sprzętu kolumnowego: Limit ciśnienia sprzętu kolumnowego (rys. 1.12), który jest maksymalnym ciśnieniem, jakie sprzęt może wytrzymać bez uszkodzenia. Wartość ta jest stała dla każdego typu kolumny. Wyciek z kolumny może być oznaką nadmiernego nacisku na osprzęt kolumny. Wartość graniczna ciśnienia osprzętu kolumny jest podana w instrukcji i na liście kolumn UNICORN™ odpowiednio dla każdego typu kolumny.
   

Rysunek 1.12. Limit ciśnienia sprzętowego kolumny to maksymalne ciśnienie, jakie kolumna może wytrzymać bez uszkodzeń.

2. W celu ochrony złoża upakowanego: Ciśnienie delta (Δp) lub maksymalne ciśnienie nad złożem upakowanym to maksymalne ciśnienie, jakie może wytrzymać złoże upakowane medium chromatograficznego bez ryzyka powstania szczeliny (rys. 1.13) lub zapadnięcia się złoża. Wartość ta zmienia się w zależności od warunków. Typowa wartość Δp lub maksymalnego spadku ciśnienia na upakowanym złożu jest podana dla każdego typu kolumny w instrukcji i na liście kolumn UNICORN. Należy jednak pamiętać, że Δp jest indywidualna dla każdej kolumny i należy ją określić. Procedura ta została opisana w instrukcji 29-0272-71. Złoże upakowane jest najlepiej chronione poprzez kontrolowanie natężenia przepływu. W przypadku roztworów o wysokiej lepkości i/lub niskiej temperaturze należy stosować niższe natężenia przepływu (Tabela 1.3).

Tabela 1.3. Przykład wartości granicznych natężenia przepływu przy różnej lepkości i temperaturze, Superose 6 Increase 10/300 GL

Temperatura	Prędkość przepływu (ml/min)
20 ºC do 25 ºC	Maksymalne natężenie przepływu, woda Maksymalne natężenie przepływu, 20% etanol	1.5 0,75
4 ºC do 8 ºC	Maksymalne natężenie przepływu, woda Maksymalne natężenie przepływu, 20% etanolu	0.75 0,35

Rysunek 1.13. Maksymalne ciśnienie nad złożem upakowanym to maksymalne ciśnienie, jakie może wytrzymać złoże upakowane medium chromatograficznego bez tworzenia się szczelin. Nie jest to wartość stała.