Przewodnik krok po kroku dla zestawu KitAlysis™ do badań przesiewowych reakcji krzyżowego sprzęgania Suzuki-Miyaura
![Schematyczne przedstawienie katalizowanej palladem reakcji krzyżowego sprzęgania pomiędzy halogenkiem arylowym i arylowym boronianem, w wyniku której powstaje pojedynczy podstawiony pierścień benzenowy. Schematyczne przedstawienie katalizowanej palladem reakcji krzyżowego sprzęgania pomiędzy halogenkiem arylowym i arylowym boronianem, w wyniku której powstaje pojedynczy podstawiony pierścień benzenowy.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/protocols/chemistry-and-synthesis/reaction-design-and-optimization/materials-required/materials-required.jpg)
- 1 woreczek mylarowy z KitAlysis Zestawu do przesiewania reakcji Suzuki-Miyaura i będziesz używać następujących komponentów
- 6 x 4 wstępnie zważone katalizatory w szklanych fiolkach z mieszadłami i matą zamykającą
- 4 puste fiolki po 4 ml roztworu podstawowego substratu - 1 NOWA KitAlysis 24-dołkowa folia zastępcza bloku reakcyjnego<
- 1 (2 ml) ampułka każda toluenu, THF, n- butanolu, DMAc i aq. 1.5 M K3PO4 (w pudełkach z ampułkami)
- 4 NOWE pręty mieszające<
- KitAlysis 24-dołkowy blok reakcyjny (sprzedawany oddzielnie)
- KitAlysis Benchtop Inertion Box (sprzedawany oddzielnie) lub pudełko na rękawiczki/torba na rękawiczki
- KitAlysis Torque Screwdriver Set (sprzedawany oddzielnie)
Dodatkowe (niedołączone) potrzebne elementy:
- .Pipeta (0-100 µL) & końcówki
- 4 (1 mL) strzykawki z długimi igłami
- Twój (het)arylowy halogenek i (het)arylowy boronian
- Nitrogen (lub Argon): z linii wyciągowej lub zbiornika
- 1 płyta grzejna z możliwością mieszania
- 1 płyta mieszająca (lub płyta grzejna do użycia bez ogrzewania)
- Fiolki HPLC, 96-dołkowy blok automatycznego próbnika HPLC lub płytki TLC
Set-Up Procedure
- Podgrzej gorącą płytkę do 60°C (użyj łaźni olejowej lub drugiego bloku reakcyjnego, aby utrzymać temperaturę i uniknąć pikowania). Temperatury reakcji Suzuki-Miyaura mogą wahać się od temperatury pokojowej do 120 °C, ale 60 °C jest ogólnym i bardzo dobrym punktem wyjścia.
- Umieść NOWY KitAlysis 24-dołkową folię zastępczą bloku reakcyjnego na pokrywie bloku reakcyjnego (upewnij się, że wszystkie otwory, w tym otwór sondy temperatury, pokrywają się z odpowiednimi otworami w folii).
- Sprawdź wszystkie śruby, aby upewnić się, że nie są zerwane. Wymień wszystkie zerwane śruby na dostarczone zamienniki.
- Umieść KitAlysis Benchtop Inertion Box z rurką podłączoną do gazu obojętnego na drugiej, nieogrzewanej płytce mieszającej (patrz konfiguracja KitAlysis Benchtop Inertion Box w celu uzyskania szczegółowych informacji).
- Umieść KitAlysis 24-dołkowy blok reakcyjny z pokrywką w KitAlysis Benchtop Inertion Box. Rozpocząć przepływ azotu i przeciągnąć 5 minut. Pozostawić przepływ azotu do końca konfiguracji.
- Odważyć oba substraty bezpośrednio do wszystkich pustych fiolek reakcyjnych o pojemności 4 ml zgodnie z recepturą (dostarczoną w plik Excela do pobrania) dodawanie rozpuszczalnika i roztworu podstawowego. Dodaj jedno mieszadło do każdej fiolki z mieszaniną. Oznacz jako "DMAc mieszanina substratów A", "Toluene mieszanina substratów B", "n-butanol mieszanina substratów C" i "THF mieszanina substratów D").
- Częściowo otwórz pokrywę na KitAlysis Benchtop Inertion Box. Umieść "DMAc Substrate Mixture A" i "Toluene Substrate Mixture B" w dwóch otworach znajdujących się po lewej stronie tacy dyfuzora Inertion Box. Umieść "n-butanol Substrate Mixture C" i "THF Substrate Mixture D" w dwóch otworach po prawej stronie płytki. Upewnij się, że jedna fiolka jest umieszczona w środkowym otworze po obu stronach. Takie umieszczenie fiolki pozwala na najlepszy przepływ gazu obojętnego (zdejmij pokrywki z mieszanin stałych przed umieszczeniem ich w zalecanych otworach, zachowując pokrywki w pudełku do późniejszego użycia w razie potrzeby).
- Przenieś 24-fiolkowe, wstępnie załadowane katalizatory w nakrętkach do bloku reakcyjnego, upewniając się, że są one załadowane zgodnie z pasującym schematem (A1: lewy górny róg) na opakowaniu i bloku reakcyjnym. Pozostaw matę na pokrywie.
- Używając krakera do ampułek, otwórz po 1 ampułce DMAc, Toluenu, n-butanolu i THF i szybko umieść w otworach ampułek znajdujących się wzdłuż dna Inertion Box, poniżej bloku reakcyjnego. Następnie otwórz 1 ampułkę roztworu bazowego i umieść ją w pozostałym otworze po obu stronach płytki.
- Gdy wszystkie składniki znajdą się w KitAlysis Benchtop Inertion Box, zamknij pokrywę i odkurzaj przez dodatkowe 5 minut. Pozostaw przepływający azot do końca konfiguracji.
- Oczyść igłę i strzykawkę w otworze dyfuzora azotu 2x, pociągając, a następnie popychając tłok. Używając oczyszczonej igły i strzykawki, dodaj wymagane ilości rozpuszczalnika do otwartych fiolek z mieszaniną substratów. Nie dodawaj roztworu podstawowego do żadnej mieszaniny substratów - jest on dodawany bezpośrednio do każdej z 24 fiolek reakcyjnych jako ostatni krok.
- Mieszaj mieszaniny aż do uzyskania roztworu (1-2 min). W przypadku zawiesin, patrz "dodatkowe wskazówki" poniżej.
- Podczas mieszania mieszanin, ostrożnie zdejmij matę zakrywającą z 24 fiolek, wstępnie załadowanych katalizatorów w bloku reakcyjnym.
- Dozować roztwory podstawowe (za każdym razem używając nowej końcówki pipety)
- Dozować 100 µl "DMAc Substrate Mixture A" do fiolek A1-A6 zgodnie z poniższym schematem.
- Dozować 100 µL "mieszaniny substratów toluenu B" do fiolek B1-B6 zgodnie z poniższym schematem.
- Dozować 100 µL "mieszaniny substratów butanolu C" do fiolek C1-C6 zgodnie z poniższym schematem.
- Dozuj 100 µL i "THF Substrate Mixture D" do fiolek D1-D6 zgodnie z poniższym schematem.
Może pozostać bardzo mała ilość nadmiaru roztworu dla każdej mieszaniny. Zachowaj go jako wzorzec reakcji dla HPLC/TLC później.
- Dozuj 20 µL roztworu aq. 1.5 M K3PO4 mieszaniny roztworów do wszystkich fiolek A1-D6. Pomocne jest podawanie sobie lokalizacji fiolek w trakcie wykonywania zadania w celu śledzenia (A1, A2 itd.).
![Instrukcje dawkowania dla DMAc, toluenu, n-butanolu, THF i K3PO4 Kolorowa siatka przedstawiająca mikropłytkę z instrukcjami dodawania substancji chemicznych do określonych dołków.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/protocols/chemistry-and-synthesis/reaction-design-and-optimization/dose-dmac-toluene-n-butanol/dose-dmac-toluene-n-butanol.jpg)
Rysunek 1.Instrukcje dawkowania dla DMAc, toluenu, n-butanolu, THF i K3PO4
- Po dozowaniu wszystkich mieszanin substratów i bazy zgodnie z recepturą, weź pokrywę KitAlysis 24-Well Reaction Block i wyrównaj śruby z otworami w płytce.Upewnij się, że otwory sondy temperatury znajdują się w jednej linii zarówno na pokrywie, jak i na bloku.
- Przykręć pokrywę zgodnie ze wskazówkami i wzorem przedstawionym w sekcji "dodatkowe wskazówki" poniżej. Przed wyjęciem KitAlysis 24-dołkowego bloku reakcyjnego z pudełka, upewnij się, że pokrywa jest równomiernie uszczelniona na podstawie. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego przykręcania.
- Po całkowitym uszczelnieniu wyjmij KitAlysis 24-dołkowy blok reakcyjny z pudełka. Umieść na podgrzanej płycie grzejnej z sondą przez pokrywę i włożoną do bloku. Ogrzewać w temperaturze 60°C przez noc, mieszając z prędkością 300 obr. Wyższe lub niższe temperatury mogą być optymalne, ale 60 °C jest dobrym punktem wyjścia.
- Przygotuj roztwór gaszący / wzorzec wewnętrzny w butelce z wymienną pokrywką zgodnie z poniższym przepisem do analizy HPLC. Możliwa jest również analiza TLC.
- Po zakończeniu reakcji postępuj zgodnie z poniższą procedurą roboczą, aby wygasić reakcje, uczynić je bardziej odpowiednimi do analizy i dodać wzorzec wewnętrzny.
Roztwór wygaszający/wzorzec wewnętrzny
- 49 mL CH3CN
- 1 mL AcOH
- 15.4 mg bifenylu (KitAlysis wzorzec wewnętrzny dostarczony w zestawie) W butelce znajduje się nadmiar, więc należy go zważyć.
Uwaga: Z tego przepisu uzyskuje się 50 ml roztworu podstawowego, który jest wystarczający dla wszystkich czterech zestawów przesiewowych w KitAlysis Suzuki-Miyaura Cross-Coupling Reaction Screening Kit. Ilość wzorca wewnętrznego wynosi 10 mol% na reakcję. Tak więc duży pik produktu do małego wzorca wewnętrznego wskazuje na dobrą reakcję.
Work-up Procedure and Analysis
- Cool Reaction Block. Zdejmij pokrywę za pomocą małego śrubokręta bez momentu obrotowego.
- Sprawdź każdą fiolkę pod kątem utraty rozpuszczalnika i zapisz.
- Dodaj 500 µL przygotowanego roztworu gaszącego do każdej fiolki za pomocą pipety.
- Założyć pokrywkę, dokręcić środkową śrubę i mieszać na płytce mieszającej (BEZ OGRZEWANIA) przez 2-3 minuty.
- Po 2-3 minutach mieszania odstawić płytkę (bez mieszania) na 5 minut, aby umożliwić nierozpuszczalnemu materiałowi osadzenie się z roztworu na dnie fiolek.
- Podczas gdy płytka odpoczywa, dodaj 700 µl acetonitrylu do każdej z 24 indywidualnie oznakowanych (A1, A2 itd.) fiolek HPLC lub do każdej z 24 studzienek 96-dołkowego bloku automatycznego próbnika HPLC/UPLC (patrz "dodatkowe zalecane materiały" poniżej, aby uzyskać sugestie dotyczące bloku automatycznego próbnika i maty nasadkowej).
- Ostrożnie zdejmij pokrywę z KitAlysis 24-dołkowego bloku reakcyjnego.
- Używając czystej pipety za każdym razem, pobierz porcję 25 µL z każdej fiolki do odpowiednich fiolek HPLC lub bloku HPLC . Uważaj, aby pobrać materiał z górnej części fiolek, aby uniknąć wytrącenia się osadu.
- Uruchom na automatycznym próbniku HPLC. Może być konieczne dostosowanie ilości acetonitrylu z sugerowanych 700 µL, aby dostosować go do unikalnego systemu HPLC.
Dodatkowe wskazówki
Uszczelnianie płytki - przykręcanie pokrywy
Prawidłowe uszczelnienie płytki ma kluczowe znaczenie dla sukcesu. Kluczem jest lekki, równomierny nacisk na pokrywę bloku, aby utrzymać pokrywę płasko podczas uszczelniania.
- Dokręć śruby, upewniając się, że otwory sondy temperatury w podstawie i pokrywie są wyrównane w 24-dołkowym bloku reakcyjnym KitAlysis.
- Wstępne płukanie: Używając kciuka i palca wskazującego, naciśnij pokrywę pudełka, aż zrówna się z fiolkami. Następnie, używając śrubokręta dynamometrycznego KitAlysis Torque Screwdriver, włóż śruby, aż zrównają się, ale nie dokręcą, z górną częścią pudełka, zgodnie ze wzorem krzyża podanym poniżej. Sprawdź, czy pokrywa jest równomiernie uszczelniona na podstawie ze wszystkich stron. Wykonaj tę wizualną kontrolę, aby uniknąć konieczności odkręcania pokrywy i ponownego wkręcania śrub.
- Dokręcanie: Powtarzaj ten sam schemat, aż KitAlysis Torque Screwdriver "kliknie", wskazując całkowite dokręcenie. Obejdź blok jeszcze raz, aby upewnić się, że wszystkie śruby są dokręcone.
![Screw pattern Wzór śrub dla 24-dołkowych płytek reakcyjnych. Obraz przedstawia prostokątny kontur z ośmioma okręgami ułożonymi w dwóch kolumnach i czterech rzędach wewnątrz niego. Każdy okrąg reprezentuje studzienkę i jest ponumerowany od 1 do 9 na czerwono, wskazując kolejność przykręcania lub odkręcania płytek reakcyjnych. Numery nie są ułożone sekwencyjnie, ale są umieszczone pozornie losowo, aby zapewnić prawidłową kolejność dokręcania.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/protocols/chemistry-and-synthesis/reaction-design-and-optimization/screw-pattern/screw-pattern.jpg)
Rysunek 2.Wzór śrub dla 24-dołkowych płytek reakcyjnych
Sonda do płyty grzejnej nie mieści się w otworze bloku reakcyjnego
Użyj małej łaźni olejowej lub innego metalowego bloku (aby uzyskać najlepsze wyniki) z tyłu płyty grzejnej i umieść tam sondę. Umieść blok reakcyjny jak najbliżej środka płyty grzejnej, aby uzyskać bardziej równomierne mieszanie.
Dodawanie zawiesiny
Z powodu wąskiego otworu końcówek pipety, dodawanie zawiesiny spowoduje zablokowanie. Aby pomóc w równomiernym dozowaniu, wystarczy odciąć koniec końcówki przy pierwszym znaczniku (~10 mm). Aby zapewnić równomierne rozproszenie porcji, bardzo ważne jest, aby mieszanina była dobrze mieszana podczas pobierania porcji do dozowania do odpowiedniej fiolki reakcyjnej.
![Snip pipette Przezroczysta końcówka pipety z przerywaną linią wskazującą przybliżone miejsce odcięcia końcówki, około 10 milimetrów od końcówki. Para fioletowych nożyczek jest przedstawiona na lewo od przerywanej linii, sugerując czynność cięcia.](/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/images/technical-documents/protocols/chemistry-and-synthesis/reaction-design-and-optimization/snip-pipette/snip-pipette.jpg)
Rysunek 3.Odetnij około 10 mm od końca pipety
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?