SAE0147

Proteaza trombiny, znakowana biotyną

human recombinant,expressed in HEK 293 cells, ≥5000 units/mL

• Synonim(y): Czynnik IIa, fibrynogenaza, trombaza
• Kod UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.77

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: human
• rekombinowane: expressed in HEK 293 cells
• stężenie: ≥5000 units/mL
• metody: protein extraction: suitable
• przydatność: suitable for additive or modifier in the separation of proteins or peptides
• Zastosowanie: life science and biopharma
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −20°C

Opis

Opis ogólny

Trombina jest endolityczną proteazą serynową, która selektywnie rozszczepia wiązania Arg-Gly fibrynogenu, tworząc fibrynę i uwalniając fibrynopeptydy A i B.1,2
Optymalne miejsca rozszczepienia trombiny są następujące:
1. A-B-Pro-Arg-||-X-Y, gdzie A i B są aminokwasami hydrofobowymi, a X i Y są aminokwasami niekwaśnymi.
2. Gly-Arg-||-Gly
Rekombinowana ludzka proteaza trombinowa ulega ekspresji w ludzkich komórkach HEK 293 jako heterodimer glikoproteinowy. Białko zredukowane DTT migruje jako dwa pasma ∼31 kDa (łańcuch ciężki) i ∼6 kDa (łańcuch lekki) na SDS-PAGE. Białko to jest wytwarzane w ludzkich komórkach, bez dodatku surowicy. System ekspresji ludzkich komórek pozwala na glikozylację i fałdowanie podobne do ludzkiego, a także często wspiera wyższą aktywność białka.
Ta proteaza trombinowa jest przydatna do rozszczepiania rekombinowanych białek, które są wyrażane jako białka fuzyjne z tą sekwencją między domeną nośnikową a interesującym białkiem.

Zastosowanie

Ta biotynylowana proteaza trombinowa może być stosowana do rozszczepiania na kolumnie białek fuzyjnych z miejscem rozszczepienia trombiny. Specyficznie rozszczepia białko będące przedmiotem zainteresowania z białka fuzyjnego związanego z kolumną, pozostawiając domenę fuzyjną lub znacznik związany z kolumną powinowactwa (np. kolumną Ni-NTA) i eluując tylko białko będące przedmiotem zainteresowania.
Ta metoda jest korzystna w porównaniu z rozszczepianiem po elucji z kilku powodów:

• Eliminuje większość zanieczyszczeń zwykle związanych z oczyszczaniem na kolumnach Ni-chelatujących.
• Umożliwia łagodniejsze warunki elucji, z dodatkową elastycznością w składzie buforu elucyjnego. Może to złagodzić agregację i inaktywację białek.

Po rozszczepieniu proteazę można usunąć za pomocą dowolnych kulek sprzężonych z awidyną lub streptawidyną.

Cechy i korzyści

Produkt jest dostarczany w buforze wodnym o pH 6,0, z 50% (v/v) glicerolem.
Katalityczny zakres pH: 11,5-10
Optymalne pH: 11-8,3
(Uwaga: trombina wytrąca się przy pH ≤5)
Masa cząsteczkowa: 4,12 37,4 kDa
Zakres pI ludzkich izozymów: 6,35-7,6
E280 (1%): 12-18,3

Ta znakowana biotyną proteaza trombinowa umożliwia rozszczepianie na kolumnie białek fuzyjnych z miejscem rozszczepienia trombiny.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 10 - Combustible liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 1