P6782

ペルオキシダーゼ from horseradish

Type VI-A, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol), 950-2000 units/mg solid (using ABTS)

• 別名: ドナー:過酸化水素オキシドレダクターゼ, 西洋ワサビペルオキシダーゼ
• CAS番号: 9003-99-0
• Enzyme Commission number: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-668-6
• MDL番号: MFCD00071339
• UNSPSCコード: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

特性

• タイプ: Type VI-A
• 品質水準: 300
• 形状: essentially salt-free, lyophilized powder
• 比活性: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol); 950-2000 units/mg solid (using ABTS)
• 分子量: ~44 kDa
• 溶解性: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0); H₂O: soluble
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing
• 保管温度: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• InChI Key: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

詳細

詳細

西洋ワサビペルオキシダ-ゼは西洋ワサビ(Amoracia rusticana)の根から単離された酵素で、ペルオキシダ-ゼのフェロプロトポルフィリン類に属します。HRPは4個のジスルフィド架橋結合を有する1本のポリペプチドです。18%の糖を含む糖タンパク質です。糖の組成はガラクト-ス、アラビノ-ス、キシロ-ス、フコ-ス、マンノ-ス、マンノサミン、ガラクトサミンからなり、個々のアイソザイムによって異なります。 この酵素の分子量(約44 kDa)には、ポリペプチド鎖(33,890 Da)、ヘミン+Ca²⁺(約700 Da)、糖(約9,400 Da)が含まれます。HRPには少なくとも7種類のアイソザイムが存在します。 西洋ワサビペルオキシダ-ゼアイソザイムの等電点は3.0~9.0です。

アプリケーション

Sigmaの酵素は、ガラクトースを検出するための高速及び高感度の、長期的に安定なガラクトースオキシダーゼ‐ペルオキシダーゼバイオセンサーの開発に使用されています。Lactobacillus sp.増殖用の3,3′,5,5′-テトラメチルベンジジン（TMB）を含有する培地（MRS寒天培地）プレートの成分として使用されています。TMBは、ペルオキシダーゼの発色性基質として作用します。ペルオキシダーゼは乳酸桿菌により産生されたH₂O₂からO₂を発生させ、TMBはO₂の存在下でコロニーを青色に染色します。したがって、空気中、5％CO₂ 下で48時間培養後、MRS寒天培地上でH₂O₂を産生するコロニーは濃青色に見えます。H₂O₂非産生コロニーは無色です。ポリビニルアルコールの西洋ワサビペルオキシダーゼへの安定化効果を試験するために使用されています。また、溶液中のグルコース及び過酸化物の測定にも使用されます。

西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）は、西洋ワサビの根（Amoracia rusticana）から単離されます。 ウェスタンブロット、ELISA、および免疫組織化学などの生化学アプリケーションに使用されます。 西洋ワサビペルオキシダーゼは、弱いシグナルを増幅し、タンパク質などのターゲット分子の検出性を向上します。 製品P6782は、VI-A型で、基本的には無塩の凍結乾燥粉末です。 コレステロールおよびコレステロールエステルを定量するため、ならびにハイドロゲルおよびシリコンハイドロゲルコンタクトレンズへのin vitroでの脂質沈着を試験するために使用されます。

生物化学的／生理学的作用

HRPは過酸化水素（H₂O₂）と容易に結合し、その生成物［HRP-H₂O₂］複合体は幅広い種類の水素供与体を酸化することができます。至適pHは6.0～6.5で、酵素は5.0～9.0のpH範囲で最も安定です。HRPは、グルタルアルデヒド、過ヨウ素酸塩酸化、ジスルフィド結合を含むいくつかの異なる方法で抗体コンジュゲートを形成することが可能であり、アミノ及びチオール架橋剤も使用できます。β-ガラクトシダーゼ及びアルカリホスファターゼ酵素標識よりも小さく安定です。このため最も望ましい標識となっています。また、グリコシル化により非特異的結合がさらに低下します。アジ化ナトリウム、シアン化物、L-シスチン、二クロム酸塩、エチレンチオウレア、ヒドロキシルアミン、硫化物、バナジン酸、p-アミノ安息香酸及びCd²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺、Mn²⁺、Ni²⁺、Pb²⁺イオンは酵素活性を阻害することが見出されています。

西洋ワサビペルオキシダーゼを基質とインキュベーションすると、標的分子の着色、蛍光又は発光誘導体が生成し定量が可能となります。 西洋ワサビペルオキシダーゼは、cydAB変異体において阻害レベルをわずかに低減させることが示されています。

包装

容量は、固形分の重量(mg)に基づいています。

関連事項

製品番号 P8375と同様の製品です。

単位の定義

1 ABTSユニットは、pH 5.0、25°C、1分間で、1.0 μmolのABTSを酸化する酵素量です。

1ピロガロールユニットは、pH 6.0、20°Cで 20秒あたり1.0 mgのプルプロガリンをピロガロールから生成する酵素量です。

調製ノート

0.1 Mリン酸緩衝液（pH 6.0）に1 mg/mLの濃度で溶解した本製品の溶液は、室温下で2週間以上活性を保ちます。本溶液は、凍結-融解サイクル5回後においても活性状態を維持します。

アナリシスノート

RZ(Reinheitszahl)値は、0.5~1.0 mg/mL脱イオン水溶液で測定したA₄₀₃/A₂₇₅の吸光度比です。これはヘミン含量を測定するもので、酵素活性を測定するものではありません。RZ値の高い標品でも酵素活性が低いことがあります。

本製品は、ABTSを用いて定量しているため、他社製品の単位(固体1 mgあたり約1,000 unit)と容易に比較することが可能です。

その他情報

ペルオキシダーゼに関する詳細情は、www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorerをご覧ください。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H317 - H334
• 注意書き: P261 - P272 - P280 - P284 - P302 + P352 - P333 + P313
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1 - Skin Sens. 1
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 3
• 個人用保護具 (PPE): Eyeshields, Gloves, type N95 (US)