11667327001

哺乳類血液用DNA分離キット

kit of for 25 reactions

• 別名: DNA分離
• UNSPSCコード: 41105500

特性

• 品質水準: 100
• メーカー／製品名: Roche
• 包装: kit of for 25 reactions

詳細

詳細

DNAアイソレーションキット（哺乳類血液用）は、哺乳類の全血、リンパ球、またはバフィーコートのサンプル1～10 mLからDNAを迅速に分離します。

血液は細胞、タンパク質、代謝物などを含む複雑な混合物であるため、全血からのDNAの分離が困難な場合があります。細胞の大半（>99％）は核を持たない赤血球であるため、DNAは含まれません。白血球には核とDNAが含まれています。したがって、血液由来DNAは、単球、リンパ球、または顆粒球の3種類の白血球のいずれかから分離する必要があります。

サンプル材料：
ヒト全血（ヘパリンナトリウム、EDTA、またはクエン酸ナトリウムで処理）：1～10 mL
分離されたリンパ球：1～10 mL
分離されたバフィーコート：少なくとも1.0 x 107個の白血球を含む、10～20 mLの全血のバフィーコート。

分離されたDNAの純度： 平均A 260 / A 280比：1.7～1.9

アプリケーション

DNAアイソレーションキット（哺乳類血液用）により、以下のような大半の分子生物学アプリケーションに適した精製DNAが得られます。

• PCR／ロングPCR
• 配列決定
• 制限消化
• サザンブロッティング
• クローニング

哺乳類血液用DNA分離キットは、単一ヌクレオチド多型ジェノタイピングを目的として喘息患者の血液からゲノムDNAを分離するために使用されています。

特徴および利点

• 複数のサンプルを同時に処理します。

DNAは<90分（+再懸濁時間30～60分）で簡単に精製できます。

• 費用対効果に優れたキットをご利用いただけます。

自作した場合と同等の費用で、より高速なDNA精製を実現します。

• 一貫した信頼性の高い結果が得られます。

白血球量の異なるサンプルを様々な量（1～10 mL）で分析することが可能です。

• 安全性を改善します。

カオトロピック塩、有害な有機溶媒、およびカラム精製ステップは使用しません。

構成

• 赤血球溶解バッファー
• 白血球溶解バッファー
• タンパク質沈殿溶液

品質

キットの各ロットに対し、ヒト全血からのDNA精製能について検査し、その後、Expand Long Template PCR SystemによるPCRを介して4.8 kb tPAフラグメントを特異的に増幅します。産生した4.8 kb tPAをアガロースゲル電気泳動により可視化し、適切な陽性および陰性対照と比較します。陽性対照と同等の強度の単一の4.8 kb tPAバンドが確認できます。また、キットのバッファー中のDNアーゼコンタミネーションの有無についても検査します。各溶液を1 μg pBR322 DNAとともに+37℃で6時間インキュベートします。次に、DNAをアガロースゲル電気泳動により可視化し、陽性対照と比較し、直鎖状または切断プラスミドDNAが確認できるか判定します。

調製ノート

DNAアイソレーションキット（哺乳類血液用）は、選択的な赤血球溶解により全血から白血球を分離しています。強アニオン系界面活性剤の存在下で、白血球が溶解された後、タンパク質が脱水および沈降により除去されます。精製DNAはその後エタノール沈殿により回収されます。

その他情報

図1：DNAアイソレーションキット（哺乳類血液用）で調製した哺乳類血液由来の大きなDNAフラグメントの増幅。 DNAは2つの研究サンプルから調製されました。1つはヒト血液10 mL、もう1つはマウス血液10 mLを含みます。各DNA標本のアリコートをテンプレートとし、Expand Long Template PCR Systemを使用していくつかの遺伝子フラグメントを増幅しました。PCR産物はゲル電気泳動により分析されました。
左パネル：ヒトサンプルから増幅された遺伝子フラグメント
レーン2、3：25 ng DNAから増幅されたtPAフラグメント（9.3 kb）
レーン4、5：50 ng DNAから増幅されたtPAフラグメント（15 kb）
レーン6、7：100 ng DNAから増幅されたβ-グロビンフラグメント（23 kb）
レーン8、9：200 ng DNAから増幅されたβ-グロビンフラグメント（28 kb）
レーン1、10：DNA分子量マーカーIII
右パネル：マウスサンプルから増幅された遺伝子フラグメント
レーン2、3：330 ng DNAから増幅されたIL-2遺伝子（4.2 kb）
レーン4、5：100 ng DNAから増幅されたα-2コラーゲンフラグメント（5.6 kb）
レーン6、7：50 ng DNAから増幅されたα-2コラーゲンフラグメント（10.4 kb）
レーン8、9：100 ng DNAから増幅されたα-2コラーゲンフラグメント（15.4 kb）
レーン1、10：DNA分子量マーカーIII

図2：DNAアイソレーションキット（哺乳類血液用）で調製した様々なヒト血液サンプル由来DNAのサザンブロット分析。DNAは、様々な抗凝固剤を含むヒトの血液、リンパ球、バフィーコートの標本など、いくつかの研究サンプルから調製されました。10 μgの各調製物をEco RIで消化し、ゲル電気泳動で分離し、サザンブロッティングによりナイロン膜に転写しました。各サンプルのn-ras遺伝子は、DIG標識n-rasプローブで検出されました。
レーン2、3：クエン酸ナトリウムを含む血液サンプル
レーン4、5：ヘパリンを含む血液サンプル
レーン6、7：EDTAナトリウムを含む血液サンプル
レーン8、9：バフィーコート標本
レーン10、11：リンパ球標本
レーン1、12：DNA分子量マーカーVII
結果：各レーンには、予想されるサイズの単一のハイブリッドバンドのみが含まれていました。

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): does not flash
• 引火点(℃): does not flash