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由来生物
mouse
品質水準
抗体製品の状態
purified immunoglobulin
抗体製品タイプ
primary antibodies
クローン
PH8, monoclonal
化学種の反応性
human
メーカー／製品名
Chemicon®
テクニック
immunohistochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable
アイソタイプ
IgG1
NCBIアクセッション番号
輸送温度
wet ice
ターゲットの翻訳後修飾
unmodified
遺伝子情報
human ... TPH1(7166)
詳細
PH8抗体は、マウスモノクローナル抗体であり、トリプトファンヒドロキシラーゼ（TRH）、チロシンヒドロキシラーゼ（TYH）、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（PAH）の共通エピトープに結合します1。文献ではこのモノクローナル抗体はPH8として引用されています。チロシンヒドロキシラーゼ（TYH）は、チロシンをジヒドロキシフェニルアラニン（L-dopa）に変換する酵素です。L-dopaは、カテコールアミン神経伝達物質であるドーパミン、ノルアドレナリン、アドレナリンの前駆体です。トリプトファンヒドロキシラーゼ（TRH）は、5-ヒドロキシトリプトファンをセロトニンに変換する酵素です。新鮮組織では、PH8抗体がTYHとTRHに結合するため、TYH-含有カテコールアミン作動性ニューロン2およびセロトニン作動性ニューロン3,4,5のマーカーです。トリプトファンヒドロキシラーゼ（TRH）は、5-ヒドロキシトリプトファンをセロトニンに変換するため、セロトニンのマーカーとして用いることができます。セロトニンは速やかに代謝され、死後組織中では抗セロトニン抗体で検出できません。 ホルマリン固定したヒト組織では、チロシンヒドロキシラーゼ（TYH）の抗原決定基が変化しているため、PH8抗体はトリプトファンヒドロキシラーゼ（TRH）のみに結合します3,4,5。そのため、PH8抗体は、固定したヒト組織のセロトニン作動性ニューロンを特異的に同定するために使用できます。フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（PAH）は、PH8抗体を用いて肝組織切片中で検出できます。
アプリケーション
PH8抗体は、免疫組織化学によりドーパミン作動性およびセロトニン作動性ニューロンを同定するために使用でき、TYH、PAH、TRHのウェスタンブロット分析、免疫沈降、および免疫組織化学に使用できます。
プロトコル
免疫組織染色
PH8抗体は、ヒトおよびラット脳幹組織のドーパミン作動性およびセロトニン作動性ニューロンの免疫組織化学的検出に使用できます。
1.組織をホルマリン固定し、使用前に最低5日間ホルマリン中で保存します。
2.0.1M Tris pH 7.4バッファー中の30%スクロースを用いて、組織を24～72時間凍結保護します。
3.滑走式ミクロトームで厚さ50 μmに切ります。
4.染色手順を開始する前に、組織サンプルをTrisバッファーで洗浄します。
5.組織サンプルを50%アルコールで3 x 15分間処理します。
6.組織サンプルを50%アルコールと3% H2O2で20分間処理します。
7.組織をTrisバッファー中10%正常ウシ血清で20分間処理します。 これにより内在性H2O2染色をブロックします。
8.PH8抗体をTrisバッファーで希釈し、組織サンプルに加え、1～3日間インキュベートします。推奨希釈倍率は1:2,000～1:10,000です。 高い抗体濃度では、すべてのモノアミン作動性ニューロンが染色され、セロトニン作動性細胞とカテコールアミン作動性細胞が区別できません。 抗体濃縮液を希釈することで、染色強度の差により細胞タイプが区別可能になります。 低い濃度（希釈倍率1:5,000～1:10,000）では、セロトニン作動性細胞のみが染色されます。
9.組織を洗浄し（3 x 15分間）、次にビオチン化抗マウス二次抗体を添加し、オービタルシェーカーで室温（RT）で1時間インキュベートします。
10.組織を洗浄し（3 x 15分間）、オービタルシェーカーでRTで三次複合体（ELITE KIT, Vector, USA）とともに1時間インキュベートします。
11.組織を洗浄し（3 x 15分間）、オービタルシェーカーでRTで、Tris緩衝ジアミノベンジジン基質とともに10分間インキュベートします。 0.1% H2O2を添加し、オービタルシェーカーでRTでさらに5分間インキュベートします。
12.組織をゼラチン化スライドに載せ、乾燥させてから顕微鏡観察します。
プロトコル
免疫組織染色
PH8抗体は、ヒトおよびラット脳幹組織のドーパミン作動性およびセロトニン作動性ニューロンの免疫組織化学的検出に使用できます。
1.組織をホルマリン固定し、使用前に最低5日間ホルマリン中で保存します。
2.0.1M Tris pH 7.4バッファー中の30%スクロースを用いて、組織を24～72時間凍結保護します。
3.滑走式ミクロトームで厚さ50 μmに切ります。
4.染色手順を開始する前に、組織サンプルをTrisバッファーで洗浄します。
5.組織サンプルを50%アルコールで3 x 15分間処理します。
6.組織サンプルを50%アルコールと3% H2O2で20分間処理します。
7.組織をTrisバッファー中10%正常ウシ血清で20分間処理します。 これにより内在性H2O2染色をブロックします。
8.PH8抗体をTrisバッファーで希釈し、組織サンプルに加え、1～3日間インキュベートします。推奨希釈倍率は1:2,000～1:10,000です。 高い抗体濃度では、すべてのモノアミン作動性ニューロンが染色され、セロトニン作動性細胞とカテコールアミン作動性細胞が区別できません。 抗体濃縮液を希釈することで、染色強度の差により細胞タイプが区別可能になります。 低い濃度（希釈倍率1:5,000～1:10,000）では、セロトニン作動性細胞のみが染色されます。
9.組織を洗浄し（3 x 15分間）、次にビオチン化抗マウス二次抗体を添加し、オービタルシェーカーで室温（RT）で1時間インキュベートします。
10.組織を洗浄し（3 x 15分間）、オービタルシェーカーでRTで三次複合体（ELITE KIT, Vector, USA）とともに1時間インキュベートします。
11.組織を洗浄し（3 x 15分間）、オービタルシェーカーでRTで、Tris緩衝ジアミノベンジジン基質とともに10分間インキュベートします。 0.1% H2O2を添加し、オービタルシェーカーでRTでさらに5分間インキュベートします。
12.組織をゼラチン化スライドに載せ、乾燥させてから顕微鏡観察します。
この抗トリプトファンヒドロキシラーゼ／チロシンヒドロキシラーゼ／フェニルアラニンヒドロキシラーゼ抗体、クローンPH8は、トリプトファンヒドロキシラーゼ／チロシンヒドロキシラーゼ／フェニルアラニンヒドロキシラーゼの検出において、IHC、IP、WBでの使用が検証されています。
物理的形状
フォーマット：精製
免疫グロブリン分画は、プロテインGクロマトグラフィーで精製されています。リン酸緩衝食塩水（PBS)中2mg/mLの500?g液体タンパク質。本製品は、0.22ミクロンフィルターで無菌ろ過して提供しています。
保管および安定性
PH8抗体は、常温で液体として出荷されます。 液体の抗体は、2～8°Cで保存すると最長6か月間安定です。
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 2
引火点(°F)
Not applicable
引火点(℃)
Not applicable
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
MAB5278:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
Fiona M Bright et al.
Journal of neuropathology and experimental neurology, 76(10), 864-873 (2017-09-20)
Serotonin (5-hydroxytryptamine [5-HT]) neurons in the medulla oblongata project extensively to key autonomic and respiratory nuclei in the brainstem and spinal cord regulating critical homeostatic functions. Multiple abnormalities in markers of 5-HT function in the medulla in sudden infant death
Activation and stabilization of human tryptophan hydroxylase 2 by phosphorylation and 14-3-3 binding.
Ingeborg Winge,Jeffrey A McKinney,Ming Ying,Clive S D'Santos,Rune Kleppe,Per M Knappskog,Jan Haavik
The Biochemical Journal null
A new model for allosteric regulation of phenylalanine hydroxylase: implications for disease and therapeutics.
Jaffe, EK; Stith, L; Lawrence, SH; Andrake, M; Dunbrack, RL
Archives of Biochemistry and Biophysics null
5-HT2A receptors are concentrated in regions of the human infant medulla involved in respiratory and autonomic control.
David S Paterson, Ryan Darnall, David S Paterson, Ryan Darnall, David S Paterson et al.
Autonomic Neuroscience : Basic & Clinical null
The development of nicotinic receptors in the human medulla oblongata: inter-relationship with the serotonergic system.
Duncan, JR; Paterson, DS; Kinney, HC
Autonomic Neuroscience : Basic & Clinical null
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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